应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆的时候，含目的片段的质粒和不含目的片段的质粒会进入同一个感受态细胞中吗
101/1返回列表
查看: 2763  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] TA克隆的时候，含目的片段的质粒和不含目的片段的质粒会进入同一个感受态细胞中吗 已有3人参与

RT，菌落PCR，挑单菌落PCR发现，用M13通用引物PCR，出来2条片段，根据大小判定一个是含有目的片段的结果，一个是不含目的片段的结果，含目的片段的质粒和不含目的片段的质粒会进入同一个感受态细胞中吗
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-12-07 13:38:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

FTD2015

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以出现啊，你想如果酶切不完全，或者仅仅是单酶切，阳性质粒和重组质粒都存在，这种概率是有的。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2015-12-07 13:52:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by FTD2015 at 2015-12-07 13:52:07
可以出现啊，你想如果酶切不完全，或者仅仅是单酶切，阳性质粒和重组质粒都存在，这种概率是有的。

关键是没酶切呢，TA克隆的时候只是质粒跟目的片段连接而已，然后在转化进入感受态细胞里面
赞一下 回复此楼
3楼2015-12-07 19:35:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生科深似海

新虫 (小有名气)
一般不会  可能是菌落没涂开 两个克隆长到一块儿了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-12-07 19:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyfskj

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在感受态细胞转化中，加入质粒后，适当地延长静置时间可以提高质粒的转化效率，原因是使质粒可以被感受态细胞充分吸附。在质粒转化中，经常会遇到多个质粒共转染一个细胞的情况。
赞一下 回复此楼
向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。
5楼2015-12-07 19:44:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 生科深似海 at 2015-12-07 19:41:05
一般不会  可能是菌落没涂开 两个克隆长到一块儿了

就是说一个感受态细胞一般只会进一个质粒？ 我记得以前我做菌落PCR的时候都是只有一条片段的，最近几次都是2条，不知道是不是引物被污染的原因
赞一下 回复此楼
6楼2015-12-08 10:38:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zyfskj at 2015-12-07 19:44:58
在感受态细胞转化中，加入质粒后，适当地延长静置时间可以提高质粒的转化效率，原因是使质粒可以被感受态细胞充分吸附。在质粒转化中，经常会遇到多个质粒共转染一个细胞的情况。

好吧。。请问你做过酶切吗，如果这样的话提取质粒后有2种，单酶切后有2条带，割胶回收自己的目的片段后会不会浓度很低，我需要酶切后浓度在100ng/ul，拿来合成探针用
赞一下 回复此楼
7楼2015-12-08 10:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

享受雅雨

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ta克隆有很多假阳性的
赞一下 回复此楼
8楼2015-12-08 10:48:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyfskj

新虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-12-08 10:40:02
好吧。。请问你做过酶切吗，如果这样的话提取质粒后有2种，单酶切后有2条带，割胶回收自己的目的片段后会不会浓度很低，我需要酶切后浓度在100ng/ul，拿来合成探针用...

一个转化子，这一小堆菌里提出的质粒，我觉得占主要的还是你的连上的那个,你可以将这个菌进行扩培养再提质粒那样浓度就高了对吗？一开始挑的转化子长得菌的量只是粗略让你判断是否连上了，如果你觉得连上了，就切一下，再次确认一下，或者 pcr 你的质粒是否有目的片段。只有验证成功了才会扩培酶切回收。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。
9楼2015-12-09 10:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

远丽123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-12-08 10:40:02
好吧。。请问你做过酶切吗，如果这样的话提取质粒后有2种，单酶切后有2条带，割胶回收自己的目的片段后会不会浓度很低，我需要酶切后浓度在100ng/ul，拿来合成探针用...

切胶回收后浓度会低 我建议你可以用高保真的酶来扩 扩出来之后再切胶回收 再用回收的片段扩PCR 这样应该可以得到单一条带

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2015-12-09 12:27:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qaz139687 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 河北省自然科学基金 +5 Peterchao 2026-05-18 8/400 2026-05-24 11:58 by 晓晓爱翠翠
[基金申请] 西安交大新媒学院副院长用撤稿论文结题 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:16 by kudofaye
[教师之家] 论文撤稿了 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:06 by Equinoxhua
[教师之家] 某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路！ +4 zju2000 2026-05-21 5/250 2026-05-24 09:35 by songwz
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 9/450 2026-05-24 08:47 by bjvtcliu
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hvkbtfonbv 2026-05-23 3/150 2026-05-24 08:01 by 9ps9vgkqva
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 pmo95bazuy 2026-05-23 7/350 2026-05-24 06:35 by fpo5ljpv91
[基金申请] 揭秘青基评审内幕：几个A才能顺利中标 +3 国自然国社科中 2026-05-23 4/200 2026-05-23 15:37 by 2000zf36392
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[考博] 博士申请 +3 焦晓明 2026-05-21 3/150 2026-05-23 11:26 by mlc840311
[论文投稿] 投稿求助，期刊 +4 希冀，有书读 2026-05-20 8/400 2026-05-22 10:16 by 希冀，有书读
[文学芳草园] 献血感触 +7 呀呀好傻 2026-05-19 13/650 2026-05-21 20:15 by 呀呀好傻
[基金申请] 面上本子正文33页，违规吗？会被低分嘛？ +14 1234567wang 2026-05-17 16/800 2026-05-21 17:58 by 脆脆的饼干
[基金申请] 国自然评分 +4 无名者登山 2026-05-20 5/250 2026-05-21 16:35 by swuq
[基金申请] 国自然上会要求 +7 无名者登山 2026-05-18 11/550 2026-05-21 15:50 by draco1987
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[基金申请] 评审有感 +15 popular289 2026-05-18 26/1300 2026-05-21 10:35 by 西葫芦炒鸡蛋
[有机交流] 反应很差，大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博，可以边工作边读全日制嘛？ 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭