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qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] TA克隆的时候,含目的片段的质粒和不含目的片段的质粒会进入同一个感受态细胞中吗已有3人参与

RT,菌落PCR,挑单菌落PCR发现,用M13通用引物PCR,出来2条片段,根据大小判定一个是含有目的片段的结果,一个是不含目的片段的结果,含目的片段的质粒和不含目的片段的质粒会进入同一个感受态细胞中吗
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zyfskj

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
在感受态细胞转化中,加入质粒后,适当地延长静置时间可以提高质粒的转化效率,原因是使质粒可以被感受态细胞充分吸附。在质粒转化中,经常会遇到多个质粒共转染一个细胞的情况。
向我乞求怜悯吧,我会狠狠拒绝的。
5楼2015-12-07 19:44:58
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zyfskj

新虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-12-08 10:40:02
好吧。。请问你做过酶切吗,如果这样的话提取质粒后有2种,单酶切后有2条带,割胶回收自己的目的片段后会不会浓度很低,我需要酶切后浓度在100ng/ul,拿来合成探针用...

一个转化子,这一小堆菌里提出的质粒,我觉得占主要的还是你的连上的那个,你可以将这个菌进行扩培养再提质粒那样浓度就高了对吗?一开始挑的转化子长得菌的量只是粗略让你判断是否连上了,如果你觉得连上了,就切一下,再次确认一下,或者 pcr 你的质粒是否有目的片段。只有验证成功了才会扩培酶切回收。

发自小木虫Android客户端
向我乞求怜悯吧,我会狠狠拒绝的。
9楼2015-12-09 10:52:54
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