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Tutub

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于纯化蛋白的一些问题 已有3人参与

最近在做纯化蛋白的实验,用的阴离子交换柱,纯化过程中出的杂峰很高,剃度洗脱的蛋白峰比较小,但是峰还是很明显的,经过电泳分析,杂峰有条带,而剃度洗脱的峰显示不出蛋白条带,这是为什么?求帮助

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辉102526

新虫 (初入文坛)

梯度溶液前的溶液ph值可能不太对,不适于阴离子纯化条件,会提前被洗掉

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-03-13 00:34:04
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Tutub

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 辉102526 at 2017-03-13 00:34:04
梯度溶液前的溶液ph值可能不太对,不适于阴离子纯化条件,会提前被洗掉

那我要的蛋白等电点是5.6,那个溶液的ph应该是多少?

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3楼2017-03-13 09:24:57
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
问题没描述清楚,洗脱的杂峰是什么时候洗脱的,是没拉梯度直接洗脱的么。拉梯度怎么电泳没蛋白。直接洗脱不纯很正常,拉梯度洗脱蛋白浓度变低了,条带会变淡,不至于没有,问题有可能出在电泳上。
4楼2017-03-13 13:42:55
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Tutub

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hc-material at 2017-03-13 13:42:55
问题没描述清楚,洗脱的杂峰是什么时候洗脱的,是没拉梯度直接洗脱的么。拉梯度怎么电泳没蛋白。直接洗脱不纯很正常,拉梯度洗脱蛋白浓度变低了,条带会变淡,不至于没有,问题有可能出在电泳上。

梯度洗脱前洗的杂峰,可是杂峰有条带,感觉蛋白全部在杂峰里面出来了。

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5楼2017-03-13 21:18:25
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My-life

捐助贵宾 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Tutub at 2017-03-13 09:24:57
那我要的蛋白等电点是5.6,那个溶液的ph应该是多少?
...

pI 5.6,那缓冲液pH应该高于pI,使你蛋白带有负电性,从而被Q柱吸附。
6楼2017-03-14 17:23:11
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Tutub

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by My-life at 2017-03-14 17:23:11
pI 5.6,那缓冲液pH应该高于pI,使你蛋白带有负电性,从而被Q柱吸附。...

嗯呢,用的ph6.5的缓冲液在尝试

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7楼2017-03-15 08:14:22
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medi812

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看你的柱子推荐的pKa吧 一般要跟你的pI差0.5-1个单位,太弱了或太强都会带下来杂质
8楼2017-03-27 04:27:28
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lff20126206

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问你用的阴离子交换柱是哪家公司的试剂盒呀?
9楼2017-04-20 13:57:54
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Tutub

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by lff20126206 at 2017-04-20 13:57:54
请问你用的阴离子交换柱是哪家公司的试剂盒呀?

用的GE的

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10楼2017-05-27 07:46:12
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