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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

[交流] 为什么我提质粒,得到的DNA浓度特别低? 已有1人参与

从培养的大肠杆菌中提取质粒。提取时,加3到4.5毫升菌液,使用试剂盒,按照步骤提取。最后得到的DNA浓度,提得高的批次有100到250纳克每微升,提得低的批次只有50几纳克每微升。我师姐用同样的试剂盒,她说她能提到近500纳克每微升。求解释,求提取质粒的小技巧。

使用的试剂盒如下:
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李保磊

金虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-18 18:27:35
钱塘幼麟: 金币+5, 谢谢! 2016-11-29 09:29:59
引用回帖:
7楼: Originally posted by 李保磊 at 2016-11-15 19:15:58
①菌液的浓度的不够,可能同样的过夜时间,得到的菌液浓度不同

②因菌种的不同,质粒的拷贝数不同,有些是一些低拷贝,浓度较低
③不能完全按照试剂盒的步骤来,对于不同的菌株,你可能和生产厂家的菌株不一定相同,因此有不同的提取过程中有量的差异,需要摸索,多问问你自己实验室的老师和师兄师姐
④操作过程中,你的因素也很大,技术不是很娴熟,造成一部分质粒流失
……

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做最棒的自己!!
8楼2016-11-15 19:22:13
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普通回帖

钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

试剂盒:
QIAGEN
QIAprep  Spin
Miniprep Kit(250)

不好意思,突然发现图片格式不符合。
2楼2016-11-14 10:31:50
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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

差不多找到一个图,同款试剂,就是试剂量少的盒子。
为什么我提质粒,得到的DNA浓度特别低?
000-yanTqVurIEzp.jpg

3楼2016-11-14 10:35:49
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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

4楼2016-11-14 17:28:22
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lemonvivi

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
估计是菌体不够浓

发自小木虫Android客户端
5楼2016-11-14 23:01:26
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
抗生素是不是失效了,重新涂板挑单克隆,适当多加些抗生素,应该就好了。提取质粒太常规的实验了,国产试剂盒足够了。
6楼2016-11-15 17:00:09
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李保磊

金虫 (著名写手)

①菌液的浓度的不够,可能同样的过夜时间,得到的菌液浓度不同

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做最棒的自己!!
7楼2016-11-15 19:15:58
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不是试剂盒的问题

发自小木虫Android客户端
9楼2016-11-15 22:54:28
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a13515517892

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个你要区分载体的高拷贝还是低拷贝,以及培养出来的菌的浓淡
10楼2016-11-16 10:46:08
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