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doctor_phd

新虫 (正式写手)

[求助] 蛋白表达可溶,但是纯化时出现沉淀 已有2人参与

大家好,我有一个蛋白是分枝杆菌里面的,在大肠里面异源表达,能够表达出可溶性蛋白,但是在纯化过程中和Ni柱结合时,蛋白发生了很严重沉淀【不是因为在震动太剧烈】,而且在后面透析【或者直接脱盐柱】除掉咪唑时又再一次出现很严重的沉淀,我们推测是因为蛋白虽然表达了,但是没有再大肠中正常折叠,不知道各位大神有没有碰到这种清况或者有这方面的经验,谢谢各位啦,感激不尽!
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doctor_phd

新虫 (正式写手)

求各位经验
2楼2016-11-13 12:42:09
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
doctor_phd: 金币+4 2016-11-14 18:47:48
这种现象很普遍,可以尝试加一些助溶剂,尿素啊,甘氨酸,精氨酸,或者有二硫键了,可以加一些DTT等,还有一些非离子型表面活性剂等等。多尝试。
3楼2016-11-14 10:35:15
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

是不是ph不对,或者盐浓度过高

发自小木虫Android客户端
I am not a hero , but I served with heroes!
4楼2016-11-14 13:56:35
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earth

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
doctor_phd: 金币+4 2016-11-14 18:48:21
蛋白浓度不能太高,可以少摇点菌。纯化时加10%的甘油,同时把NaCl的浓度适当加大会有所缓解。
5楼2016-11-14 14:28:05
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doctor_phd

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wlt728 at 2016-11-14 13:56:35
是不是ph不对,或者盐浓度过高

应该不是,不和Ni柱结合蛋白是可溶的,而且蛋白的等电点在9.09.我们的buffer是7.5,应该不是PH的原因
6楼2016-11-14 18:56:49
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