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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 关于镍柱纯化的问题
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沉浮华夏

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于镍柱纯化的问题 已有4人参与

小弟最近在做镍柱纯化，最后纯化完之后加0.5M NaOH洗的时候每次柱子都堵，有什么结局办法没
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1楼 2016-10-08 17:32:57
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)
★
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回收填料？
先用EDTA洗掉镍了？
镍与NaOH反应会生成沉淀的。
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2楼2016-10-09 08:43:34
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木木清月月鸟

禁虫 (正式写手)
★
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3楼2016-10-09 08:45:18
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
每次都堵只有一个原因，那就是柱子里面有固行物，比如上柱前没过滤掉的细胞碎片，或者非特异吸附的蛋白遇氢氧化钠固化等。这样对柱子的损失很大。建议小柱子上柱前一定要过滤（先离心在0.22或0.45um膜过滤），洗脱后，先用1M咪唑走走，或者2M氯化钠走走，在过氢氧化钠（0.1M)即可。祝顺利。
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4楼2016-10-09 13:53:56
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沉浮华夏

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 木木清月月鸟 at 2016-10-09 08:45:18
先用高浓度咪唑冲一会儿，再用NaOH洗

就是下柱子的时候吗？
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5楼2016-10-09 16:12:41
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沉浮华夏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hc-material at 2016-10-09 13:53:56
每次都堵只有一个原因，那就是柱子里面有固行物，比如上柱前没过滤掉的细胞碎片，或者非特异吸附的蛋白遇氢氧化钠固化等。这样对柱子的损失很大。建议小柱子上柱前一定要过滤（先离心在0.22或0.45um膜过滤），洗脱后 ...

哦哦，恍然大悟，谢谢回复
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6楼2016-10-09 16:14:32
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沉浮华夏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuweitao at 2016-10-09 08:43:34
回收填料？
先用EDTA洗掉镍了？
镍与NaOH反应会生成沉淀的。

用EDTA洗掉镍不是属于重生柱子吗？最后不还得用硫酸镍洗？
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7楼2016-10-09 16:22:31
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)
★
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7楼: Originally posted by 沉浮华夏 at 2016-10-09 16:22:31
用EDTA洗掉镍不是属于重生柱子吗？最后不还得用硫酸镍洗？...

如果你的柱料是需要挂镍的，纯化完后就要用EDTA把镍柱上的镍洗掉，等下次纯化的时候再重新挂镍。
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8楼2016-10-10 09:32:55
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