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王希庆

禁虫 (小有名气)

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fudan671

木虫 (著名写手)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-22 07:48:37
重新提速,把试剂全部换掉

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-08-21 17:21:04
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sweetcoffei

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以考虑:1、质粒拷贝数是否低。2、抗生素效率是否符合要求。3、质粒沉淀时间、温度是否合理。从你叙述的情况看,菌内应该有质粒(PCR结果明显),只是最后的得率不高。如果是1,考虑用氯霉素扩增;如果是2,换新的抗生素;如果是3,降低质粒沉淀温度,延长时间。

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6楼2016-08-23 07:48:58
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普通回帖

王希庆

禁虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-22 07:48:43
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3楼2016-08-21 21:31:44
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xuegyx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
抗生素是否失活产生了大量杂菌?还有摇菌时间不要过短或过长(16h左右)

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2016-08-22 11:48:54
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王希庆

禁虫 (小有名气)

送红花一朵
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5楼2016-08-22 17:26:13
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王希庆 at 2016-08-22 17:26:13
我这个质粒是温敏性的,不能超过30度培养,所以我培养时间在20个小时左右,抗生素的问题我再验证一下。谢谢
...

DH5a算是比较稳定的了,37也可以的,你PCR时有做阴性吗,再用无质粒的DH5a跑下菌液PCR,你这PCR的应该都是假阳性。
采菊东篱下,悠然见南山。
7楼2016-08-23 08:03:09
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王希庆

禁虫 (小有名气)

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8楼2016-08-23 08:23:47
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王希庆

禁虫 (小有名气)

送红花一朵
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9楼2016-08-23 08:26:58
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781055707

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 王希庆 at 2016-08-23 08:23:47
假阳性不太可能,我提的质粒虽然没有条带,但是做质粒PCR有条带,说明不是假阳性。每次PCR我都做空白对照。现在就是质粒浓度太低
...

你应该有无质粒的DH5a菌吧,也摇过夜,提质粒,PCR看看。
采菊东篱下,悠然见南山。
10楼2016-08-23 12:14:41
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