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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助，质粒提取
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王希庆

禁虫 (小有名气)
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1楼 2016-08-21 17:09:29
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fudan671

木虫 (著名写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-22 07:48:37
重新提速，把试剂全部换掉

发自小木虫IOS客户端
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2楼2016-08-21 17:21:04
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sweetcoffei

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以考虑：1、质粒拷贝数是否低。2、抗生素效率是否符合要求。3、质粒沉淀时间、温度是否合理。从你叙述的情况看，菌内应该有质粒（PCR结果明显），只是最后的得率不高。如果是1，考虑用氯霉素扩增；如果是2，换新的抗生素；如果是3，降低质粒沉淀温度，延长时间。
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王希庆
6楼2016-08-23 07:48:58
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王希庆

禁虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-22 07:48:43
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3楼2016-08-21 21:31:44
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xuegyx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
抗生素是否失活产生了大量杂菌？还有摇菌时间不要过短或过长（16h左右）
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王希庆
4楼2016-08-22 11:48:54
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王希庆

禁虫 (小有名气)
送红花一朵
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5楼2016-08-22 17:26:13
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王希庆 at 2016-08-22 17:26:13
我这个质粒是温敏性的，不能超过30度培养，所以我培养时间在20个小时左右，抗生素的问题我再验证一下。谢谢
...

DH5a算是比较稳定的了，37也可以的，你PCR时有做阴性吗，再用无质粒的DH5a跑下菌液PCR，你这PCR的应该都是假阳性。
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采菊东篱下，悠然见南山。
7楼2016-08-23 08:03:09
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王希庆

禁虫 (小有名气)
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8楼2016-08-23 08:23:47
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王希庆

禁虫 (小有名气)
送红花一朵
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9楼2016-08-23 08:26:58
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 王希庆 at 2016-08-23 08:23:47
假阳性不太可能，我提的质粒虽然没有条带，但是做质粒PCR有条带，说明不是假阳性。每次PCR我都做空白对照。现在就是质粒浓度太低
...

你应该有无质粒的DH5a菌吧，也摇过夜，提质粒，PCR看看。
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采菊东篱下，悠然见南山。
10楼2016-08-23 12:14:41
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