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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 为什么用大肠杆菌做转化涂板后长出来的假阳性会那么多，有哪些原因呢
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若若宣

新虫 (初入文坛)

[交流] 为什么用大肠杆菌做转化涂板后长出来的假阳性会那么多，有哪些原因呢 已有10人参与

为什么用大肠杆菌做转化涂板后长出来的假阳性会那么多

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1楼 2016-06-03 08:45:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

kaobo2012

木虫 (正式写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:06:03
原因多多，比如，1.抗性是不是有效、该菌是不是已经被含有抗性的质粒污染。2.目的片段连接效率低，大部分是载体自连。等等。
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3楼2016-06-03 12:59:38
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安静de执着14

新虫 (著名写手)
★
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我觉得，你最好把问题表达的更清楚一些，你是转化的质粒还是DNA片段呢？

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6楼2016-06-04 11:45:02
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)
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xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 支持积极回帖 2016-06-18 08:17:49
1，平板上长满满一板，转入抗性液体培养就不长： 抗生素过期了，用新的抗生素。
2，测序是空载：连载体时，先将DNA，载体，buffer，H2O混匀，连接酶最后加入体系，否则容易造成DNA或载体自连接。
3.其他参考上面的虫友
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8楼2016-06-04 13:55:40
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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)
★
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怀疑假阳性多，那就在挑菌的时候多挑几个吧！
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2楼2016-06-03 11:01:04
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dd370432136

铁虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:06:54
最大的可能就是载体没有酶切完全，量一定要少，最多1微克载体，酶切25微升体系，快切酶酶切时间3小时以上，慢切酶12小时以上。目的片段一样。胶回收20微升洗脱，连接25微升，载体推荐最多0.03pmols，放心！

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4楼2016-06-04 11:25:35
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dd370432136

铁虫 (小有名气)
如果连出来了请告诉我你的做法，谢谢

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5楼2016-06-04 11:26:28
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Cathering_w

新虫 (正式写手)
★
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酶切效率：摸索下条件，酶切段时间电泳检测；载体自连：去磷酸化
其实连上就好，多少又能怎样？

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博士终于毕业了，未来还有什么困难能难得倒我呢！加油我得未来。
7楼2016-06-04 12:41:02
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
★
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这是正常现象。可以用蓝白斑筛选区别阴性克隆

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9楼2016-06-06 07:39:48
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)
同样的问题

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10楼2016-06-11 12:28:54
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