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若若宣

新虫 (初入文坛)

[交流] 为什么用大肠杆菌做转化涂板后长出来的假阳性会那么多,有哪些原因呢 已有10人参与

为什么用大肠杆菌做转化涂板后长出来的假阳性会那么多

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kaobo2012

木虫 (正式写手)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:06:03
原因多多,比如,1.抗性是不是有效、该菌是不是已经被含有抗性的质粒污染。2.目的片段连接效率低,大部分是载体自连。等等。
3楼2016-06-03 12:59:38
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安静de执着14

新虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我觉得,你最好把问题表达的更清楚一些,你是转化的质粒还是DNA片段呢?

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6楼2016-06-04 11:45:02
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 支持积极回帖 2016-06-18 08:17:49
1,平板上长满满一板,转入抗性液体培养就不长: 抗生素过期了,用新的抗生素。
2,测序是空载:连载体时,先将DNA,载体,buffer,H2O混匀,连接酶最后加入体系,否则容易造成DNA或载体自连接。
3.其他参考上面的虫友
8楼2016-06-04 13:55:40
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普通回帖

雨儿天0320

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
怀疑假阳性多,那就在挑菌的时候多挑几个吧!
2楼2016-06-03 11:01:04
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dd370432136

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:06:54
最大的可能就是载体没有酶切完全,量一定要少,最多1微克载体,酶切25微升体系,快切酶酶切时间3小时以上,慢切酶12小时以上。目的片段一样。胶回收20微升洗脱,连接25微升,载体推荐最多0.03pmols,放心!

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4楼2016-06-04 11:25:35
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dd370432136

铁虫 (小有名气)

如果连出来了请告诉我你的做法,谢谢

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5楼2016-06-04 11:26:28
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Cathering_w

新虫 (正式写手)


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酶切效率:摸索下条件,酶切段时间电泳检测;载体自连:去磷酸化
其实连上就好,多少又能怎样?

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博士终于毕业了,未来还有什么困难能难得倒我呢!加油我得未来。
7楼2016-06-04 12:41:02
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这是正常现象。可以用蓝白斑筛选区别阴性克隆

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9楼2016-06-06 07:39:48
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)

10楼2016-06-11 12:28:54
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