| 查看: 3155 | 回复: 1 | ||
[求助]
大肠杆菌化转pcp20，删pkD13的kan抗性，kan的抗性总是删不掉？？？
|
|
用HCB1645大肠杆菌，先化转pkD46（Amp），后电转pkD13上的一个kan抗性片段，成功，在37度下培养菌种，确认pkD46 Amp的抗性已没有后（由于后面要转导的pcp20也带有Amp抗性），再化转pcp20（Amp和Cam），在30度恒温箱下用Amp盘，培养菌种，成功长出菌落，认为pcp20也化转成（同时在此过程中，kan的抗性由于pcp20的导入，被删除）。接下来纯化，挑选之前Amp盘上长出的pcp20的菌落在37摄氏度下用空盘纯化（由于pcp20是温感型，此步骤可以去除pcp20质粒，即去除Amp抗性）。再从空盘上挑选菌点同时分别在空盘、Amp、Kan盘上划点，在37度下培养，选取能在空盘上长，但不能再Amp和Kan上长的菌落，作为所要研究的菌种（这是为了验证之前所做的步骤，菌种的抗性是否被删除）。 但是，在最后一个步骤上出了问题。从空盘上挑选菌点分别在空盘、Amp、Kan盘上划点后，空盘上全部都长，Amp全部不长，Kan盘上全部都长，说明kan的抗性没去掉，这是为什么？？？预期的结果应是Amp和Kan盘上不长，而只在空盘上长。 求赐教，谢谢~~~ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
回复此楼» 猜你喜欢
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有89人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
-
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
2楼2016-04-29 09:25:44