| 查看: 2053 | 回复: 4 | ||
[求助]
大肠杆菌red重组，kan抗性去不掉？？？？ 已有1人参与
|
|
用HCB1645大肠杆菌，先化转pkD46（Amp），后电转pkD13上的一个kan抗性片段，成功，确认pkD46 Amp的抗性已没有后（由于后面要转导的pcp20也带有Amp抗性），再化转pcp20（Amp和Cam），在30度恒温箱下用Amp盘，培养菌种，成功长出菌落，认为pcp20也化转成（同时在此过程中，kan的抗性由于pcp20的导入，被删除）。接下来纯化，挑选之前Amp盘上长出的pcp20的菌落在37摄氏度下用空盘纯化（由于pcp20是温感型，此步骤可以去除pcp20质粒，即去除Amp抗性）。再从空盘上挑选菌点同时分别在空盘、Amp、Kan盘上划点，在37度下培养，选取能在空盘上长，但不能再Amp和Kan上长的菌落，作为所要研究的菌种（这是为了验证之前所做的步骤，菌种的抗性是否被删除）。 但是，在最后一个步骤上出了问题。从空盘上挑选菌点分别在空盘、Amp、Kan盘上划点后，空盘上全部都长，Amp全部不长，Kan盘上全部都长，说明kan的抗性没去掉，这是为什么？？？ 求赐教，谢谢~~~ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
回复此楼» 猜你喜欢
面上可以超过30页吧？
已经有13人回复
-
网上报道青年教师午睡中猝死、熬夜猝死的越来越多，主要哪些原因引起的？
已经有10人回复
-
为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？
已经有13人回复
-
什么是人一生最重要的？
已经有8人回复
-
版面费该交吗
已经有17人回复
-
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有19人回复
-
【博士招生】太原理工大学2026化工博士
已经有8人回复
-
280求调剂
已经有4人回复
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-10, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 09:56:07
nono2009: 金币-10, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 09:56:07
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2015-10-24 14:13:28
3楼2015-12-10 12:32:01
4楼2018-06-25 14:49:00
5楼2019-12-22 17:53:51