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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌red重组，kan抗性去不掉？？？？
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日落沙发

新虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌red重组，kan抗性去不掉？？？？ 已有1人参与

用HCB1645大肠杆菌，先化转pkD46（Amp），后电转pkD13上的一个kan抗性片段，成功，确认pkD46 Amp的抗性已没有后（由于后面要转导的pcp20也带有Amp抗性），再化转pcp20（Amp和Cam），在30度恒温箱下用Amp盘，培养菌种，成功长出菌落，认为pcp20也化转成（同时在此过程中，kan的抗性由于pcp20的导入，被删除）。接下来纯化，挑选之前Amp盘上长出的pcp20的菌落在37摄氏度下用空盘纯化（由于pcp20是温感型，此步骤可以去除pcp20质粒，即去除Amp抗性）。再从空盘上挑选菌点同时分别在空盘、Amp、Kan盘上划点，在37度下培养，选取能在空盘上长，但不能再Amp和Kan上长的菌落，作为所要研究的菌种（这是为了验证之前所做的步骤，菌种的抗性是否被删除）。
    但是，在最后一个步骤上出了问题。从空盘上挑选菌点分别在空盘、Amp、Kan盘上划点后，空盘上全部都长，Amp全部不长，Kan盘上全部都长，说明kan的抗性没去掉，这是为什么？？？
    求赐教，谢谢~~~

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-10-24 12:14:34
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tolobio

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-10, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 09:56:07
本帖内容被屏蔽
2楼2015-10-24 14:13:28
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juanzh74

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

大神，你的PKD46的AMP抗性怎么去除的啊？我的PKD46抗性都好难去除。
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3楼2015-12-10 12:32:01
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江洋大盗0524

新虫 (初入文坛)
请问你的问题解决了吗，我最近也遇到了类似的情况但是不知道是什么原因？我是先转pcp20去除了氯霉素和卡纳霉素抗性（都验证过了，确实去除），将去除完抗性的菌制作成感受态后再热转化ptkred，涂平板，长了单菌落之后，在划线在spc、cmr、kan的平板上，然后30度培养，结果三个平板都涨了菌，不知道是什么原因，很想求教一下。
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4楼2018-06-25 14:49:00
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玥玥Molly

新虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 江洋大盗0524 at 2018-06-25 14:49:00
请问你的问题解决了吗，我最近也遇到了类似的情况但是不知道是什么原因？我是先转pcp20去除了氯霉素和卡纳霉素抗性（都验证过了，确实去除），将去除完抗性的菌制作成感受态后再热转化ptkred，涂平板，长了单菌落之 ...

请问您的问题解决了吗？遇到了同样的问题
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5楼2019-12-22 17:53:51
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