应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌red重组，kan抗性去不掉？？？？
51/1返回列表
查看: 2347  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

日落沙发

新虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌red重组，kan抗性去不掉？？？？ 已有1人参与

用HCB1645大肠杆菌，先化转pkD46（Amp），后电转pkD13上的一个kan抗性片段，成功，确认pkD46 Amp的抗性已没有后（由于后面要转导的pcp20也带有Amp抗性），再化转pcp20（Amp和Cam），在30度恒温箱下用Amp盘，培养菌种，成功长出菌落，认为pcp20也化转成（同时在此过程中，kan的抗性由于pcp20的导入，被删除）。接下来纯化，挑选之前Amp盘上长出的pcp20的菌落在37摄氏度下用空盘纯化（由于pcp20是温感型，此步骤可以去除pcp20质粒，即去除Amp抗性）。再从空盘上挑选菌点同时分别在空盘、Amp、Kan盘上划点，在37度下培养，选取能在空盘上长，但不能再Amp和Kan上长的菌落，作为所要研究的菌种（这是为了验证之前所做的步骤，菌种的抗性是否被删除）。
    但是，在最后一个步骤上出了问题。从空盘上挑选菌点分别在空盘、Amp、Kan盘上划点后，空盘上全部都长，Amp全部不长，Kan盘上全部都长，说明kan的抗性没去掉，这是为什么？？？
    求赐教，谢谢~~~

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-10-24 12:14:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tolobio

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-10, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 09:56:07
本帖内容被屏蔽
2楼2015-10-24 14:13:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

juanzh74

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

大神，你的PKD46的AMP抗性怎么去除的啊？我的PKD46抗性都好难去除。
赞一下 回复此楼
3楼2015-12-10 12:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江洋大盗0524

新虫 (初入文坛)
请问你的问题解决了吗，我最近也遇到了类似的情况但是不知道是什么原因？我是先转pcp20去除了氯霉素和卡纳霉素抗性（都验证过了，确实去除），将去除完抗性的菌制作成感受态后再热转化ptkred，涂平板，长了单菌落之后，在划线在spc、cmr、kan的平板上，然后30度培养，结果三个平板都涨了菌，不知道是什么原因，很想求教一下。
赞一下 回复此楼
4楼2018-06-25 14:49:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玥玥Molly

新虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 江洋大盗0524 at 2018-06-25 14:49:00
请问你的问题解决了吗，我最近也遇到了类似的情况但是不知道是什么原因？我是先转pcp20去除了氯霉素和卡纳霉素抗性（都验证过了，确实去除），将去除完抗性的菌制作成感受态后再热转化ptkred，涂平板，长了单菌落之 ...

请问您的问题解决了吗？遇到了同样的问题
赞一下 回复此楼
5楼2019-12-22 17:53:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 日落沙发 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 4/200 2026-09-16 22:40 by Tql5LQhh5rLK
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-16 22:16 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 5/250 2026-09-16 21:39 by MHf40yA0Uhyb
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 20:50 by MHf40yA0Uhyb
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 19:15 by rRvxEj3zorCy
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +8 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 11/550 2026-09-16 18:37 by rRvxEj3zorCy
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 9/450 2026-09-16 18:36 by rRvxEj3zorCy
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 17:12 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-16 17:00 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 16:27 by i3KBRD19ERkG
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 16:24 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 16:15 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 14:39 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-16 14:36 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 08:51 by SjQobnC04j06
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭