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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 为什么用大肠杆菌做转化涂板后长出来的假阳性会那么多，有哪些原因呢
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若若宣

新虫 (初入文坛)

[交流] 为什么用大肠杆菌做转化涂板后长出来的假阳性会那么多，有哪些原因呢 已有10人参与

为什么用大肠杆菌做转化涂板后长出来的假阳性会那么多

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1楼 2016-06-03 08:45:23
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kaobo2012

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:06:03
原因多多，比如，1.抗性是不是有效、该菌是不是已经被含有抗性的质粒污染。2.目的片段连接效率低，大部分是载体自连。等等。
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3楼2016-06-03 12:59:38
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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
怀疑假阳性多，那就在挑菌的时候多挑几个吧！
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2楼2016-06-03 11:01:04
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dd370432136

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:06:54
最大的可能就是载体没有酶切完全，量一定要少，最多1微克载体，酶切25微升体系，快切酶酶切时间3小时以上，慢切酶12小时以上。目的片段一样。胶回收20微升洗脱，连接25微升，载体推荐最多0.03pmols，放心！

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4楼2016-06-04 11:25:35
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dd370432136

铁虫 (小有名气)
如果连出来了请告诉我你的做法，谢谢

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5楼2016-06-04 11:26:28
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