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shangna

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA提取的后的保存使用问题 已有1人参与

ctab法提取的植物基因组DNA,检测后纯度不错,用30ul的无菌水保存在-20℃,有以下问题请帮我回答一下,谢谢:
1.两天之内一共冻融了四次取DNA做SSR pcr用,每次放室温的时间大概两个小时,请问DNA会不会大量分解影响pcr结果
2.-20取出后将不同DNA混合做SSR pcr,为了混合均匀用枪头吹打了几次,会不会使DNA链断裂影响后续pcr实验。

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1135482512

铁杆木虫 (著名写手)

2楼2016-05-18 18:35:21
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shangna

新虫 (初入文坛)

3楼2016-05-18 20:12:11
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shangna

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 1135482512 at 2016-05-18 18:35:21
为什么不分装

因为是菜鸟,不懂

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4楼2016-05-18 20:14:53
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1135482512

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shangna at 2016-05-18 20:14:53
因为是菜鸟,不懂
...

反复冻融容易降解,你可以再次检验一下质量

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5楼2016-05-18 20:27:42
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cencheng

新虫 (小有名气)

6楼2016-05-18 22:13:07
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mexy2008

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

DNA比你想象的坚强,放心吧!如果不超过一个月,可以放4度保存,亲测无碍。
7楼2016-07-04 15:45:20
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jackyoung

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by mexy2008 at 2016-07-04 15:45:20
DNA比你想象的坚强,放心吧!如果不超过一个月,可以放4度保存,亲测无碍。

ssr的话一般扩增长度比较短,DNA降解的只要不是特别厉害都能扩增出来,但反复冻融本身不好,长期四度也不好(不信的扩增个2kb以上的片段试试,效果立竿见影),建议适当分装,尽量减少室温时间(置于冰上)。希望有用

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CestLaVie
8楼2016-07-05 08:31:35
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