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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做Western时，小分子蛋白转膜时间太久了会怎样？
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darlingbear

新虫 (小有名气)

[求助] 做Western时，小分子蛋白转膜时间太久了会怎样？ 已有4人参与

我要检测的蛋白大小是14kD，转膜用的200mA恒流，110分钟，结果条带很不明显，是不是转膜时间久了？

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1楼 2016-05-16 22:36:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

段李晓彤

银虫 (正式写手)

院士虫
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-17 07:48:58
我的21k，300毫安20分钟，200毫安我觉得四十分钟我算多了

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

darlingbear
4楼2016-05-17 06:55:11
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darlingbear

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-16 23:05:18
看膜的孔径，如果蛋白比孔径大，转膜时间久了一般没有什么问题，比孔径小，就要把握下转膜条件。

我用的是NC膜，转膜后15kD的marker还是很明显的，就是目的蛋白看不到

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5楼2016-05-17 08:44:46
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普通回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-17 07:48:23
看膜的孔径，如果蛋白比孔径大，转膜时间久了一般没有什么问题，比孔径小，就要把握下转膜条件。
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2楼2016-05-16 23:05:18
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段李晓彤

银虫 (正式写手)

院士虫
300ma15分钟就够了

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3楼2016-05-17 06:52:36
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e生物圈

捐助贵宾 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档 2016-05-25 11:28:01
本帖内容被屏蔽
6楼2016-05-17 10:17:39
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darlingbear

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 段李晓彤 at 2016-05-17 06:55:11
我的21k，300毫安20分钟，200毫安我觉得四十分钟我算多了

我最短转过1.5小时嗳，小的蛋白没有尝试过

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7楼2016-05-17 18:51:02
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Vet is king

新虫 (文坛精英)
11kd，Nc膜，湿转，恒压100v，1小时

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8楼2016-05-18 08:32:23
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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)
0.22um ，一般PVDF膜较好。电流不要过大，容易局部过热。一般考虑200mA左右，转膜时间30分钟即可。

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9楼2016-05-18 14:27:10
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
组单白吗？我200毫安120分钟没问题，如果丰度不如组蛋白不好说。

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10楼2016-05-19 17:44:28
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