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darlingbear

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[求助] 做Western时，小分子蛋白转膜时间太久了会怎样？已有4人参与

我要检测的蛋白大小是14kD，转膜用的200mA恒流，110分钟，结果条带很不明显，是不是转膜时间久了？

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1楼 2016-05-16 22:36:16

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段李晓彤

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darlingbear

4楼2016-05-17 06:55:11

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darlingbear

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2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-16 23:05:18
看膜的孔径，如果蛋白比孔径大，转膜时间久了一般没有什么问题，比孔径小，就要把握下转膜条件。

我用的是NC膜，转膜后15kD的marker还是很明显的，就是目的蛋白看不到

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5楼2016-05-17 08:44:46

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kaobo2012

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-17 07:48:23

看膜的孔径，如果蛋白比孔径大，转膜时间久了一般没有什么问题，比孔径小，就要把握下转膜条件。

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2楼2016-05-16 23:05:18

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段李晓彤

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300ma15分钟就够了

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3楼2016-05-17 06:52:36

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silicare: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档 2016-05-25 11:28:01

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6楼2016-05-17 10:17:39

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4楼: Originally posted by 段李晓彤 at 2016-05-17 06:55:11
我的21k，300毫安20分钟，200毫安我觉得四十分钟我算多了

我最短转过1.5小时嗳，小的蛋白没有尝试过

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7楼2016-05-17 18:51:02

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Vet is king

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8楼2016-05-18 08:32:23

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沉默、颜泪

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0.22um ，一般PVDF膜较好。电流不要过大，容易局部过热。一般考虑200mA左右，转膜时间30分钟即可。

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9楼2016-05-18 14:27:10

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junior850621

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组单白吗？我200毫安120分钟没问题，如果丰度不如组蛋白不好说。

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10楼2016-05-19 17:44:28

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