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darlingbear

新虫 (小有名气)

[求助] 做Western时,小分子蛋白转膜时间太久了会怎样? 已有4人参与

我要检测的蛋白大小是14kD,转膜用的200mA恒流,110分钟,结果条带很不明显,是不是转膜时间久了?

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段李晓彤

银虫 (正式写手)

院士虫


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-17 07:48:58
我的21k,300毫安20分钟,200毫安我觉得四十分钟我算多了

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4楼2016-05-17 06:55:11
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darlingbear

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-16 23:05:18
看膜的孔径,如果蛋白比孔径大,转膜时间久了一般没有什么问题,比孔径小,就要把握下转膜条件。

我用的是NC膜,转膜后15kD的marker还是很明显的,就是目的蛋白看不到

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5楼2016-05-17 08:44:46
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普通回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-17 07:48:23
看膜的孔径,如果蛋白比孔径大,转膜时间久了一般没有什么问题,比孔径小,就要把握下转膜条件。
2楼2016-05-16 23:05:18
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段李晓彤

银虫 (正式写手)

院士虫

3楼2016-05-17 06:52:36
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e生物圈

捐助贵宾 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档 2016-05-25 11:28:01
本帖内容被屏蔽

6楼2016-05-17 10:17:39
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darlingbear

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 段李晓彤 at 2016-05-17 06:55:11
我的21k,300毫安20分钟,200毫安我觉得四十分钟我算多了

我最短转过1.5小时嗳,小的蛋白没有尝试过

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7楼2016-05-17 18:51:02
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Vet is king

新虫 (文坛精英)

11kd,Nc膜,湿转,恒压100v,1小时

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8楼2016-05-18 08:32:23
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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)

0.22um ,一般PVDF膜较好。电流不要过大,容易局部过热。一般考虑200mA左右,转膜时间30分钟即可。

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9楼2016-05-18 14:27:10
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

组单白吗?我200毫安120分钟没问题,如果丰度不如组蛋白不好说。

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10楼2016-05-19 17:44:28
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