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darlingbear

新虫 (小有名气)

11楼2016-05-19 20:20:01
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烟锅八路

新虫 (小有名气)

我们实验室用的70v恒压,110分钟湿转,用的是PVDF膜

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12楼2016-05-20 09:19:47
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烟锅八路

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 烟锅八路 at 2016-05-20 09:19:47
我们实验室用的70v恒压,110分钟湿转,用的是PVDF膜

而且也是有转LC3。每次都很好。

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13楼2016-05-20 09:20:23
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

转膜是湿法还是半干法?湿法110min应该可以的。最好将未转膜的SDS-PAGE进行染色,看看目的条带是否也是比较浅,才好判断是否是转膜的问题
14楼2016-05-20 17:01:27
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kaili-007

新虫 (小有名气)

14kd一般不超过半小时吧

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人生是一场修行
15楼2016-05-20 23:15:43
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darlingbear

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by shenhaiwang at 2016-05-20 17:01:27
转膜是湿法还是半干法?湿法110min应该可以的。最好将未转膜的SDS-PAGE进行染色,看看目的条带是否也是比较浅,才好判断是否是转膜的问题

我用的是湿法,但如果是转过了的话,应该是从胶转到了膜,又从膜里转走了吧

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16楼2016-05-21 08:41:14
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lovejinghui

新虫 (小有名气)

market正常说明转膜没问题吧。

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17楼2016-05-21 09:02:47
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by darlingbear at 2016-05-21 08:41:14
我用的是湿法,但如果是转过了的话,应该是从胶转到了膜,又从膜里转走了吧
...

理论上是这种可能,现实操作中和膜的孔径和蛋白的性质也有关系。先确定你的蛋白量有没有问题,如果没有问题的话,再做一次吧
18楼2016-05-21 10:48:45
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snowcyshelly

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我做12kd的,湿法NC膜,200mA 1h,重复过很多次没有出过任何问题。我认为你可能确实转膜时间过长,你10kdmarker还看得到吗?建议保证10kd和15kd的marker都没问题,那你目的蛋白条带肯定也就没问题了……如果还有问题,那就不是转膜时间的错。
19楼2016-05-21 10:53:29
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虫虫笑了

木虫 (小有名气)

感觉转膜时间有点长了,这个要好好做几次试试看
1111
20楼2016-05-22 16:45:42
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