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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做Western时，小分子蛋白转膜时间太久了会怎样？
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darlingbear

新虫 (小有名气)

[求助] 做Western时，小分子蛋白转膜时间太久了会怎样？ 已有4人参与

我要检测的蛋白大小是14kD，转膜用的200mA恒流，110分钟，结果条带很不明显，是不是转膜时间久了？

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1楼 2016-05-16 22:36:16
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darlingbear

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by shenhaiwang at 2016-05-20 17:01:27
转膜是湿法还是半干法？湿法110min应该可以的。最好将未转膜的SDS-PAGE进行染色，看看目的条带是否也是比较浅，才好判断是否是转膜的问题

我用的是湿法，但如果是转过了的话，应该是从胶转到了膜，又从膜里转走了吧

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16楼2016-05-21 08:41:14
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-17 07:48:23
看膜的孔径，如果蛋白比孔径大，转膜时间久了一般没有什么问题，比孔径小，就要把握下转膜条件。
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2楼2016-05-16 23:05:18
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段李晓彤

银虫 (正式写手)

院士虫
300ma15分钟就够了

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3楼2016-05-17 06:52:36
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段李晓彤

银虫 (正式写手)

院士虫
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-17 07:48:58
我的21k，300毫安20分钟，200毫安我觉得四十分钟我算多了

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darlingbear
4楼2016-05-17 06:55:11
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