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leeyaoyi

金虫 (小有名气)

[求助] 重组菌的阳性克隆筛选问题 已有2人参与

如图所示,最左边是marker,marker的最大条带是5000bp。我是以pET-28a为载体,目的基因大约是700bp,但是,紧挨的marker的两条泳道却出现两条两条带(一条大于5000bp,比较淡;一条在5000bp左右,较亮),上面那条带做PCR验证没有目的条带,下面那条带做PCR却出现条带,怎么回事?

重组菌的阳性克隆筛选问题
83FDAB2B63F6C6BCF82B1D37EF99CA9C.jpg@biostar2009
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
估计是基因组DNA,质粒提取的时候裂解过头了。
生物科学
2楼2016-04-23 16:34:15
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是分别把两条带回收了,在做模板进行pcr么?会不会是不同形态质粒?建议对质粒进行酶切验证吧

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2016-04-23 21:21:38
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leeyaoyi

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-23 21:21:38
你是分别把两条带回收了,在做模板进行pcr么?会不会是不同形态质粒?建议对质粒进行酶切验证吧

两条都回收做pcr了的,也做了酶切实验,但是酶切实验没结果

发自小木虫Android客户端
4楼2016-04-24 08:14:25
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