应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pGreen系列载体转化农杆菌出现问题
31/1返回列表
查看: 2618  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

我是传奇456

金虫 (正式写手)

[求助] pGreen系列载体转化农杆菌出现问题 已有1人参与

具体情况是，pGreenII 62-SK系列载体，Kana抗性。将目的基因构建重组质粒后，在kana抗性LB中筛选阳性克隆，测序结果正确，然后进行农杆菌热激转化（质粒加入约1ug），涂在含Rif（10ug/ml）Kana(50ug/ml)的LB平板。48h后仅长了寥寥数个菌落，而control组pcambia2301长了很多。另外，目的载体同时还涂布了只含Kana(50ug/ml)的LB平板，也长了几十个菌落。

我想请问下，这种情况是为什么？是否是pGreen质粒本身问题？还是转化过程中质粒出现了问题？

试了好几次，包括质粒浓度，Rif浓度的控制等，而长的仅有的几个菌落挑了摇培后，PCR也测不到目的片段。

还请各位大侠帮忙！！

另附载体图谱

pGreen系列载体转化农杆菌出现问题
pGreenII 62-SK.png
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-10-15 10:30:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我是传奇456: 金币+5, ★有帮助, 不行的话只能试试电转了。 2015-10-16 22:06:42
.建议 做电转化看看，农杆菌化学感受态转化效率低
农杆菌菌检建议弄个100ul菌液离心后用100ul水混匀在金属浴或者PCR仪器上80-90度10min后再去做PCR
赞一下 回复此楼
。
2楼2015-10-15 10:55:05
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Eternity宇

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2015-10-15 11:20:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 我是传奇456 的主题更新
31/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 0856求调剂285 +8 吕仔龙 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by 刘兵
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 0856调剂 +4 刘梦微 2026-02-28 4/200 2026-03-01 15:35 by 吸一口猫气
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 284求调剂 +6 天下熯 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:19 by Ducount.Y
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +4 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 4/200 2026-03-01 13:15 by wang_dand
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭