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我是传奇456

金虫 (正式写手)

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[求助] pGreen系列载体转化农杆菌出现问题已有1人参与

具体情况是，pGreenII 62-SK系列载体，Kana抗性。将目的基因构建重组质粒后，在kana抗性LB中筛选阳性克隆，测序结果正确，然后进行农杆菌热激转化（质粒加入约1ug），涂在含Rif（10ug/ml）Kana(50ug/ml)的LB平板。48h后仅长了寥寥数个菌落，而control组pcambia2301长了很多。另外，目的载体同时还涂布了只含Kana(50ug/ml)的LB平板，也长了几十个菌落。

我想请问下，这种情况是为什么？是否是pGreen质粒本身问题？还是转化过程中质粒出现了问题？

试了好几次，包括质粒浓度，Rif浓度的控制等，而长的仅有的几个菌落挑了摇培后，PCR也测不到目的片段。

还请各位大侠帮忙！！