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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量的时候，内参Ct值过小，目的基因Ct值偏大。
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990104036

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量的时候，内参Ct值过小，目的基因Ct值偏大。 已有4人参与

如标题所叙述，第一次的时候目的基因Ct偏大，超过35，此时内参值在17左右。于是我增加了体系中cDNA浓度。结果目的基因降下来了，可是内参很低，有得甚至显示umdet。这种情况怎么解决。

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跟党走，有肉吃。
1楼 2016-04-12 08:28:14
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
可以一次多合成几个内参，一起跑，比较一下，一个个换太浪费时间了

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10楼2016-04-15 06:51:43
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普通回帖

990104036

木虫 (正式写手)
在线等大家的意见和建议。

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跟党走，有肉吃。
2楼2016-04-12 08:28:56
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hlxxym

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这……有点怪啊……    照理说，cDNA的量增加了，内参应该更多才对啊……

请问你的内参基因是什么呢？
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3楼2016-04-12 09:33:00
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990104036

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hlxxym at 2016-04-12 09:33:00
这……有点怪啊……    照理说，cDNA的量增加了，内参应该更多才对啊……

请问你的内参基因是什么呢？

不是吗？cDNA增加，Ct值降低，对着吧

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跟党走，有肉吃。
4楼2016-04-12 09:44:37
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990104036

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hlxxym at 2016-04-12 09:33:00
这……有点怪啊……    照理说，cDNA的量增加了，内参应该更多才对啊……

请问你的内参基因是什么呢？

内参是GAPDH

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跟党走，有肉吃。
5楼2016-04-12 09:45:10
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两个方法，一换内参，二目的基因重新设计引物
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6楼2016-04-12 09:55:01
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hlxxym at 2016-04-12 09:33:00
这……有点怪啊……    照理说，cDNA的量增加了，内参应该更多才对啊……

请问你的内参基因是什么呢？

cDNA的量增加了，内参更多，所以ct值减少呀！
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7楼2016-04-12 09:56:26
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匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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8楼2016-04-13 19:05:29
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先确定你的选材部位是否合适，有些基因在不同部位表达水平有很大差异，另外看处理因素、处理时间是否合适。排除以上因素后，同意6楼意见，或者换引物或者换内参。
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9楼2016-04-13 21:04:14
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