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圆加leaf新虫 (小有名气)
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[交流]
想让大肠杆菌表达它原来没有的蛋白，是不是必需先构建克隆载体再构建表达载体？
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本人想转一个新的基因进大肠杆菌，让他表达原来没有的一种蛋白，研究它的代谢量。 方式是靠构建质粒，可是又看到有基因克隆载体，和表达载体，有点懵了，我是不是需要先用一个克隆载体，转化进感受态细胞，让他复制，然后再提这个基因，再用这基因构建一个表达载体，再转进细胞，然后才可以稳定表达，研究代谢？！ 请各位前辈指导！！ |
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圆加leaf: 金币+4, 非常感谢！ 2016-03-30 13:41:53
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| 姑娘不需要，直接构建表达载体就行，参考大肠杆菌蛋白表达操作流程步骤原理：http://www.detaibio.com/topics/dachangganjunbiaodaliucheng-sop.html |
3楼2016-03-30 10:27:50
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我基本上都是一步到位，直接到表达载体，表达菌种！然后测个序就ok了！前后估计做了百多个，木有问题！ 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-04-01 01:03:27
2楼2016-03-30 10:21:03
原海亮
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其实克隆载体的概念太大也模糊，本身表达载体就是一个普通的克隆载体呀，只不过它本身经过改造了，相对其他克隆载体，在蛋白表达方面更有优势，但基本的克隆载体功能它也具有。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-03-30 12:24:49
圆加leaf
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5楼2016-03-30 13:41:13
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pET可以，但是大肠杆菌表达后一般目的蛋白都是以包涵体状态聚集，没有正确折叠，就没有活性。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-03-31 15:01:46
圆加leaf
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8楼2016-04-01 11:17:46
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9楼2016-04-01 11:19:25
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额不是大神，只是略懂皮毛。 pET表达你的目的蛋白特异性很强的，表达量大速度快，所以会形成包涵体，导致没活性。 感受态细胞可以用于构建你的载体，不用于表达。表达宿主菌商业化的有BL21，ROSETTA等。 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-04-01 15:41:22