应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 想让大肠杆菌表达它原来没有的蛋白，是不是必需先构建克隆载体再构建表达载体？
181/2返回列表12下一页
查看: 2091  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

圆加leaf

新虫 (小有名气)

[交流] 想让大肠杆菌表达它原来没有的蛋白，是不是必需先构建克隆载体再构建表达载体？

本人想转一个新的基因进大肠杆菌，让他表达原来没有的一种蛋白，研究它的代谢量。
方式是靠构建质粒，可是又看到有基因克隆载体，和表达载体，有点懵了，我是不是需要先用一个克隆载体，转化进感受态细胞，让他复制，然后再提这个基因，再用这基因构建一个表达载体，再转进细胞，然后才可以稳定表达，研究代谢？！
请各位前辈指导！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-03-30 09:57:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

MarchZR

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4, 非常感谢！ 2016-03-30 13:41:53
姑娘不需要，直接构建表达载体就行，参考大肠杆菌蛋白表达操作流程步骤原理：http://www.detaibio.com/topics/dachangganjunbiaodaliucheng-sop.html
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-03-30 10:27:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MT233

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4 2016-04-01 11:18:00
我基本上都是一步到位，直接到表达载体，表达菌种！然后测个序就ok了！前后估计做了百多个，木有问题！

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2016-04-01 01:03:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

sihaiming

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4 2016-03-30 13:39:50
没必要，你说的克隆载体是想获得更多的目的基因吗？还是想干嘛？你只需要将目的片段连接到表达质粒上就好了，你不用管大肠里有没有你的基因。主要看你的载体在大肠里能不能表达。比如启动子合不合适，你要用的大肠是哪个BL21还是JM109还是什么，不同菌株配不同表达载体
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-30 10:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4 2016-03-30 13:42:18
其实克隆载体的概念太大也模糊，本身表达载体就是一个普通的克隆载体呀，只不过它本身经过改造了，相对其他克隆载体，在蛋白表达方面更有优势，但基本的克隆载体功能它也具有。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-03-30 12:24:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆加leaf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sihaiming at 2016-03-30 10:21:03
没必要，你说的克隆载体是想获得更多的目的基因吗？还是想干嘛？你只需要将目的片段连接到表达质粒上就好了，你不用管大肠里有没有你的基因。主要看你的载体在大肠里能不能表达。比如启动子合不合适，你要用的大肠是 ...

谢谢，我是想让大肠杆菌表达出原本没有的蛋白，这样才能产出新的东西，这样只要表达载体就好了吧？我想用BL21，是不是就要用pET系列的载体？
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-30 13:41:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

I-Believe

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4 2016-04-01 11:15:11
引用回帖:
5楼: Originally posted by 圆加leaf at 2016-03-30 13:41:13
谢谢，我是想让大肠杆菌表达出原本没有的蛋白，这样才能产出新的东西，这样只要表达载体就好了吧？我想用BL21，是不是就要用pET系列的载体？...

pET可以，但是大肠杆菌表达后一般目的蛋白都是以包涵体状态聚集，没有正确折叠，就没有活性。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-03-31 15:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆加leaf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by I-Believe at 2016-03-31 15:01:46
pET可以，但是大肠杆菌表达后一般目的蛋白都是以包涵体状态聚集，没有正确折叠，就没有活性。
...

对不起，难得碰见大神，抱大腿啰嗦问下：1、没有活性？那是不是生产能力较弱？主要是用来生物工程产出一个指定代谢物的啊……；2、pET的载体，用JM109感受态细胞效果如何？因为想用K-12系的菌株，方便预测知道生产
赞一下 回复此楼
8楼2016-04-01 11:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆加leaf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by MT233 at 2016-04-01 01:03:27
我基本上都是一步到位，直接到表达载体，表达菌种！然后测个序就ok了！前后估计做了百多个，木有问题！

用pET然后转到JM109感受态细胞，效果怎么样？测序你一般是再把质粒提出来拿去测还是提什么去测比较准？不好意思，啰嗦问多一句~
赞一下 回复此楼
9楼2016-04-01 11:19:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

I-Believe

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 圆加leaf at 2016-04-01 11:17:46
对不起，难得碰见大神，抱大腿啰嗦问下：1、没有活性？那是不是生产能力较弱？主要是用来生物工程产出一个指定代谢物的啊……；2、pET的载体，用JM109感受态细胞效果如何？因为想用K-12系的菌株，方便预测知道生产...

额不是大神，只是略懂皮毛。
pET表达你的目的蛋白特异性很强的，表达量大速度快，所以会形成包涵体，导致没活性。
感受态细胞可以用于构建你的载体，不用于表达。表达宿主菌商业化的有BL21，ROSETTA等。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2016-04-01 15:41:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 圆加leaf 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭