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圆加leaf新虫 (小有名气)
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[交流]
想让大肠杆菌表达它原来没有的蛋白，是不是必需先构建克隆载体再构建表达载体？
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本人想转一个新的基因进大肠杆菌，让他表达原来没有的一种蛋白，研究它的代谢量。 方式是靠构建质粒，可是又看到有基因克隆载体，和表达载体，有点懵了，我是不是需要先用一个克隆载体，转化进感受态细胞，让他复制，然后再提这个基因，再用这基因构建一个表达载体，再转进细胞，然后才可以稳定表达，研究代谢？！ 请各位前辈指导！！ |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4 2016-04-01 11:15:11
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圆加leaf: 金币+4 2016-04-01 11:15:11
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pET可以，但是大肠杆菌表达后一般目的蛋白都是以包涵体状态聚集，没有正确折叠，就没有活性。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-03-31 15:01:46
2楼2016-03-30 10:21:03
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4, 非常感谢！ 2016-03-30 13:41:53
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| 姑娘不需要，直接构建表达载体就行，参考大肠杆菌蛋白表达操作流程步骤原理：http://www.detaibio.com/topics/dachangganjunbiaodaliucheng-sop.html |
3楼2016-03-30 10:27:50
原海亮
木虫 (著名写手)
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圆加leaf: 金币+4 2016-03-30 13:42:18
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4 2016-03-30 13:42:18
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其实克隆载体的概念太大也模糊，本身表达载体就是一个普通的克隆载体呀，只不过它本身经过改造了，相对其他克隆载体，在蛋白表达方面更有优势，但基本的克隆载体功能它也具有。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-03-30 12:24:49
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