24小时热门版块排行榜    

查看: 2082  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

圆加leaf

新虫 (小有名气)

[交流] 想让大肠杆菌表达它原来没有的蛋白,是不是必需先构建克隆载体再构建表达载体?

本人想转一个新的基因进大肠杆菌,让他表达原来没有的一种蛋白,研究它的代谢量。
方式是靠构建质粒,可是又看到有基因克隆载体,和表达载体,有点懵了,我是不是需要先用一个克隆载体,转化进感受态细胞,让他复制,然后再提这个基因,再用这基因构建一个表达载体,再转进细胞,然后才可以稳定表达,研究代谢?!
请各位前辈指导!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4 2016-03-30 13:42:18
其实克隆载体的概念太大也模糊,本身表达载体就是一个普通的克隆载体呀,只不过它本身经过改造了,相对其他克隆载体,在蛋白表达方面更有优势,但基本的克隆载体功能它也具有。

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-03-30 12:24:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

sihaiming

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4 2016-03-30 13:39:50
没必要,你说的克隆载体是想获得更多的目的基因吗?还是想干嘛?你只需要将目的片段连接到表达质粒上就好了,你不用管大肠里有没有你的基因。主要看你的载体在大肠里能不能表达。比如启动子合不合适,你要用的大肠是哪个BL21还是JM109还是什么,不同菌株配不同表达载体
2楼2016-03-30 10:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4, 非常感谢! 2016-03-30 13:41:53
姑娘不需要,直接构建表达载体就行,参考大肠杆菌蛋白表达操作流程步骤原理:http://www.detaibio.com/topics/dachangganjunbiaodaliucheng-sop.html
3楼2016-03-30 10:27:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆加leaf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sihaiming at 2016-03-30 10:21:03
没必要,你说的克隆载体是想获得更多的目的基因吗?还是想干嘛?你只需要将目的片段连接到表达质粒上就好了,你不用管大肠里有没有你的基因。主要看你的载体在大肠里能不能表达。比如启动子合不合适,你要用的大肠是 ...

谢谢,我是想让大肠杆菌表达出原本没有的蛋白,这样才能产出新的东西,这样只要表达载体就好了吧?我想用BL21,是不是就要用pET系列的载体?
5楼2016-03-30 13:41:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 0856求调剂285 +8 吕仔龙 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by 刘兵
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
请填处理意见