想让大肠杆菌表达它原来没有的蛋白，是不是必需先构建克隆载体再构建表达载体？ - 分子生物 - DNA重组 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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prthefu

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圆加leaf: 金币+5 2016-04-12 15:39:08

你要用你的新基因表达蛋白，那就需要先把这段基因的全长扩出来，然后再连入表达载体中，一般原核表达载体就是用大肠杆菌来做的，然后，连接转化进去后，进行检测，转化成功的，说明你的那段基因连到质粒上了，然后，你就可以做表达。但是，基因表达蛋白，是需要诱导的，你就需要紧接着做后面的诱导表达，检测蛋白，跑胶，然后，得到了蛋白，你就可以做后面的针对这个蛋白的一些实验了。

nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything

11楼2016-04-01 22:40:29

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MT233

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9楼: Originally posted by 圆加leaf at 2016-04-01 11:19:25
用pET然后转到JM109感受态细胞，效果怎么样？测序你一般是再把质粒提出来拿去测还是提什么去测比较准？不好意思，啰嗦问多一句~...

直接转表达菌，直接送保存的表达菌去测序！多收5块钱而已！

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12楼2016-04-02 00:10:42

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scofield111

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圆加leaf: 金币+2 2016-04-12 15:39:27

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6楼: Originally posted by I-Believe at 2016-03-31 15:01:46
pET可以，但是大肠杆菌表达后一般目的蛋白都是以包涵体状态聚集，没有正确折叠，就没有活性。
...

也不能一下打死，摇瓶难，发酵罐可能有点活性

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13楼2016-04-02 00:24:39

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I-Believe

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13楼: Originally posted by scofield111 at 2016-04-02 00:24:39
也不能一下打死，摇瓶难，发酵罐可能有点活性
...

是，有些系列的载体和配套菌株是促进表达可溶蛋白的。

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14楼2016-04-02 11:08:10

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oceansr

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跟我做的一样啊。成功了没有

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15楼2016-04-03 00:54:37

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chen5805

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将目的基因与表达载体连接，导入大肠杆菌，诱导表达，但不一定每个基因都能成功表达！

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16楼2016-04-03 17:22:55

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oceansr

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怎么没人回啊

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17楼2016-04-17 23:16:01

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圆加leaf

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17楼: Originally posted by oceansr at 2016-04-17 23:16:01
怎么没人回啊

还没开始做，等做再分享经验哦

18楼2016-05-05 11:03:16

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