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prthefu

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+5 2016-04-12 15:39:08
你要用你的新基因表达蛋白,那就需要先把这段基因的全长扩出来,然后再连入表达载体中,一般原核表达载体就是用大肠杆菌来做的,然后,连接转化进去后,进行检测,转化成功的,说明你的那段基因连到质粒上了,然后,你就可以做表达。但是,基因表达蛋白,是需要诱导的,你就需要紧接着做后面的诱导表达,检测蛋白,跑胶,然后,得到了蛋白,你就可以做后面的针对这个蛋白的一些实验了。
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
11楼2016-04-01 22:40:29
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MT233

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 圆加leaf at 2016-04-01 11:19:25
用pET然后转到JM109感受态细胞,效果怎么样?测序你一般是再把质粒提出来拿去测还是提什么去测比较准?不好意思,啰嗦问多一句~...

直接转表达菌,直接送保存的表达菌去测序!多收5块钱而已!

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12楼2016-04-02 00:10:42
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scofield111

银虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+2 2016-04-12 15:39:27
引用回帖:
6楼: Originally posted by I-Believe at 2016-03-31 15:01:46
pET可以,但是大肠杆菌表达后一般目的蛋白都是以包涵体状态聚集,没有正确折叠,就没有活性。
...

也不能一下打死,摇瓶难,发酵罐可能有点活性

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13楼2016-04-02 00:24:39
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I-Believe

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by scofield111 at 2016-04-02 00:24:39
也不能一下打死,摇瓶难,发酵罐可能有点活性
...

是,有些系列的载体和配套菌株是促进表达可溶蛋白的。

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14楼2016-04-02 11:08:10
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oceansr

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
跟我做的一样啊。成功了没有

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15楼2016-04-03 00:54:37
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chen5805

至尊木虫 (职业作家)

资深木虫


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
将目的基因与表达载体连接,导入大肠杆菌,诱导表达,但不一定每个基因都能成功表达!

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16楼2016-04-03 17:22:55
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oceansr

新虫 (初入文坛)

17楼2016-04-17 23:16:01
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圆加leaf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by oceansr at 2016-04-17 23:16:01
怎么没人回啊

还没开始做,等做再分享经验哦
18楼2016-05-05 11:03:16
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