24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2139  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

圆加leaf

新虫 (小有名气)

[交流] 想让大肠杆菌表达它原来没有的蛋白,是不是必需先构建克隆载体再构建表达载体?

本人想转一个新的基因进大肠杆菌,让他表达原来没有的一种蛋白,研究它的代谢量。
方式是靠构建质粒,可是又看到有基因克隆载体,和表达载体,有点懵了,我是不是需要先用一个克隆载体,转化进感受态细胞,让他复制,然后再提这个基因,再用这基因构建一个表达载体,再转进细胞,然后才可以稳定表达,研究代谢?!
请各位前辈指导!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆加leaf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by MT233 at 2016-04-01 01:03:27
我基本上都是一步到位,直接到表达载体,表达菌种!然后测个序就ok了!前后估计做了百多个,木有问题!

用pET然后转到JM109感受态细胞,效果怎么样?测序你一般是再把质粒提出来拿去测还是提什么去测比较准?不好意思,啰嗦问多一句~
9楼2016-04-01 11:19:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

sihaiming

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4 2016-03-30 13:39:50
没必要,你说的克隆载体是想获得更多的目的基因吗?还是想干嘛?你只需要将目的片段连接到表达质粒上就好了,你不用管大肠里有没有你的基因。主要看你的载体在大肠里能不能表达。比如启动子合不合适,你要用的大肠是哪个BL21还是JM109还是什么,不同菌株配不同表达载体
2楼2016-03-30 10:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4, 非常感谢! 2016-03-30 13:41:53
姑娘不需要,直接构建表达载体就行,参考大肠杆菌蛋白表达操作流程步骤原理:http://www.detaibio.com/topics/dachangganjunbiaodaliucheng-sop.html
3楼2016-03-30 10:27:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+4 2016-03-30 13:42:18
其实克隆载体的概念太大也模糊,本身表达载体就是一个普通的克隆载体呀,只不过它本身经过改造了,相对其他克隆载体,在蛋白表达方面更有优势,但基本的克隆载体功能它也具有。

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-03-30 12:24:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 349求调剂 +5 杰斯塔里斯 2026-03-21 5/250 2026-03-27 00:31 by wxiongid
[考研] 349求调剂 +4 李木子啊哈哈 2026-03-25 4/200 2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 085701环境工程,267求调剂 +4 minht 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:14 by barlinike
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] B区考研调剂 +4 yqdszhdap- 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:51 by baoball
[考研] 300分,材料,求调剂,英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
信息提示
请填处理意见