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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的基因的产物问题
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_霄蜻蜓

新虫 (小有名气)

[求助] 目的基因的产物问题 已有3人参与

现通过PCR获得一目的基因，其两端分别均带有BamH I和EcoR I限制酶位点。将其置于离心管A中用BamH I和EcoR I酶切；同时将质粒载体置于离心管B中，也用BamH I和EcoR I酶切。将A、B两管的酶切产物用T4 DNA连接酶连接。试写出可能出现的连接产物的种类和形状？

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1楼 2016-03-27 14:16:44
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lchxs465

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
2楼2016-03-27 14:23:10
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_霄蜻蜓

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lchxs465 at 2016-03-27 14:23:10
产物自连 质粒自连 产物和质粒的连接产物

双酶切怎么自连？

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3楼2016-03-27 14:31:12
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
酶切后应该进行切胶纯化，切取所需要片段进行连接

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4楼2016-03-27 15:41:23
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_霄蜻蜓

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-27 15:41:23
酶切后应该进行切胶纯化，切取所需要片段进行连接

请问有哪些情况

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5楼2016-03-27 16:14:58
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by _霄蜻蜓 at 2016-03-27 16:14:58
请问有哪些情况
...

如果不纯化就有可能自连啊，因为有相同的粘末端

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6楼2016-03-27 21:16:56
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_霄蜻蜓

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-27 21:16:56
如果不纯化就有可能自连啊，因为有相同的粘末端
...

两种不同的酶好不好

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7楼2016-03-27 22:53:25
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by _霄蜻蜓 at 2016-03-27 22:53:25
两种不同的酶好不好
...

可是你不纯化，切开的片段不就会自连

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8楼2016-03-27 23:06:26
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xuanrufeng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
载体自连   载体与目的基因连接  就这样两种情况吧  我也是正在用BamH I和EcoR I这两个酶切位点  我也准备试试
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本性难移
9楼2016-03-28 11:13:57
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流水遇行云

银虫 (小有名气)
连接后转化检测阳性就好了

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10楼2016-03-28 11:41:02
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