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150 ng（目的基因）的双链RNA样品杂交无信号，求解答？
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各位大侠，我的杂交结果出了点问题，重复两次均得到同样的结果，除了阳性对照信号很亮，目的基因均无信号。 我的实验过程是，病毒双链RNA样品目的基因150 ng（并以探针模板——割胶回收PCR产物50 ng——做阳性对照），1% TAE凝胶电泳后，凝胶置于0.5 M NaOH 1.5 M NaCl 溶液中变性15 min，换新溶液重复一次；然后 1 M Tris-HCl 1.5 M NaCl pH7.4溶液中和15 min，换新溶液重复中和一次。 然后用传统上行毛细管法转膜，转膜溶液为20XSSC. 转膜14 hr 后，拆除装置，6xssc浸膜 5min。 自然晾干数分钟后，80度真空烘箱固定膜。 后续利用Thermo的生物素探针和检测试剂盒（即原来Fermentas的试剂盒）杂交（杂交和检测均参照试剂盒提供的方法）。 检测显色后，数秒阳性对照即产生信号，样品即使过夜，也是白板一块。 着急中，望大侠出手指点。 |
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2楼2013-04-09 15:31:50