24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4229  |  回复: 18

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成 已有2人参与

请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

南宫瑾

新虫 (小有名气)

应该是cDNA模板的浓度比较低

发自小木虫Android客户端
2楼2016-03-14 13:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mahaidong520: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-14 15:10:44
内参正常说明反转录还可以,目的基因起峰晚是说循环数高么?一个可能是基因表达的问题,精细取材;再一个就可能是反转录后的浓度低。
3楼2016-03-14 13:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参的曲线来看表明你的cDNA的的起始浓度不一致,建议各样Ct值差小于0.5。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2016-03-14 18:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 13:23:53
内参正常说明反转录还可以,目的基因起峰晚是说循环数高么?一个可能是基因表达的问题,精细取材;再一个就可能是反转录后的浓度低。

测得浓度在300-700ng/ul,后稀释成30-70ng/ul,加模板为3ul,照说明书应在100ng内,正常的话浓度不会低吧,起峰都在35个循环后了,内参基因都在20-24个循环内起峰,我再把浓度提高点试试,谢谢
4楼2016-03-14 15:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yvonne9044

新虫 (正式写手)

5楼2016-03-14 15:59:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yvonne9044 at 2016-03-14 15:59:30
认为二楼正解

麻烦帮忙看一下
请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成


请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成-1



发自小木虫Android客户端
6楼2016-03-14 16:31:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yvonne9044

新虫 (正式写手)

7楼2016-03-14 17:44:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 18:53:08
好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参 ...

测的是rna浓度,反转后没有测,我在想如果把目的基因的浓度增大,那内参基因浓度也扩大,会不会对起峰有影响

发自小木虫Android客户端
9楼2016-03-15 08:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 18:53:08
好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参 ...

还有麻烦问一下,怎么样保持起始cdna浓度一致,谢谢

发自小木虫Android客户端
10楼2016-03-15 08:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mahaidong520 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程专硕324分,一志愿中国矿业大学求调剂 +6 耿耿1314 2026-04-01 6/300 2026-04-01 23:32 by chaolymer
[考研] 273求调剂 +19 李芷新1 2026-03-31 19/950 2026-04-01 21:49 by chyhaha
[考研] 332求调剂 +8 Lyy930824@ 2026-03-29 8/400 2026-04-01 18:40 by 千钧澄玉宇啊
[考研] 调剂推荐 +9 清酒714 2026-03-26 10/500 2026-04-01 16:25 by yanflower7133
[考研] 求生物学调剂 +7 15172915737 2026-04-01 7/350 2026-04-01 15:27 by 闲人终南山
[考研] 生物学 296 求调剂 +9 朵朵- 2026-03-26 11/550 2026-04-01 14:44 by 求调剂zz
[考研] 086000生物与医药 初试274求调剂 +5 小叮当来了 2026-03-30 6/300 2026-04-01 14:25 by mxj1203
[考研] 材料与化工调剂一志愿大连海事085600,349 +9 吃的不少 2026-03-30 9/450 2026-04-01 11:24 by wangjy2002
[考研] 322求调剂 +4 熹僖XX 2026-03-31 4/200 2026-04-01 08:21 by JourneyLucky
[考研] 335求调剂 +3 321* 2026-03-31 4/200 2026-04-01 00:00 by 321*
[考研] 一志愿北京科技大学材料学硕328分求调剂 +4 1段时间 2026-03-31 5/250 2026-03-31 19:56 by wxiongid
[考研] 336材料求调剂 +10 陈滢莹 2026-03-26 12/600 2026-03-31 17:59 by jp9609
[考研] 材料与化工272求调剂 +25 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 25/1250 2026-03-31 16:27 by hypershenger
[考研] 0703化学 +20 妮妮ninicgb 2026-03-27 20/1000 2026-03-31 13:33 by 无际的草原
[考研] 313求调剂 +6 卖个关子吧 2026-03-31 6/300 2026-03-31 10:58 by Jaylen.
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-31 4/200 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 279求调剂 +12 j的立方 2026-03-29 12/600 2026-03-30 20:30 by dick_runner
[有机交流] 考研调剂 +8 watb 2026-03-26 8/400 2026-03-30 18:40 by 544594351
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +6 @taotao 2026-03-26 7/350 2026-03-30 10:43 by 我是小康
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
信息提示
请填处理意见