24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4230  |  回复: 18

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成 已有2人参与

请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

南宫瑾

新虫 (小有名气)

应该是cDNA模板的浓度比较低

发自小木虫Android客户端
2楼2016-03-14 13:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mahaidong520: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-14 15:10:44
内参正常说明反转录还可以,目的基因起峰晚是说循环数高么?一个可能是基因表达的问题,精细取材;再一个就可能是反转录后的浓度低。
3楼2016-03-14 13:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参的曲线来看表明你的cDNA的的起始浓度不一致,建议各样Ct值差小于0.5。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2016-03-14 18:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 13:23:53
内参正常说明反转录还可以,目的基因起峰晚是说循环数高么?一个可能是基因表达的问题,精细取材;再一个就可能是反转录后的浓度低。

测得浓度在300-700ng/ul,后稀释成30-70ng/ul,加模板为3ul,照说明书应在100ng内,正常的话浓度不会低吧,起峰都在35个循环后了,内参基因都在20-24个循环内起峰,我再把浓度提高点试试,谢谢
4楼2016-03-14 15:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yvonne9044

新虫 (正式写手)

5楼2016-03-14 15:59:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yvonne9044 at 2016-03-14 15:59:30
认为二楼正解

麻烦帮忙看一下
请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成


请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成-1



发自小木虫Android客户端
6楼2016-03-14 16:31:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yvonne9044

新虫 (正式写手)

7楼2016-03-14 17:44:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 18:53:08
好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参 ...

测的是rna浓度,反转后没有测,我在想如果把目的基因的浓度增大,那内参基因浓度也扩大,会不会对起峰有影响

发自小木虫Android客户端
9楼2016-03-15 08:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 18:53:08
好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参 ...

还有麻烦问一下,怎么样保持起始cdna浓度一致,谢谢

发自小木虫Android客户端
10楼2016-03-15 08:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mahaidong520 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266分,一志愿电气工程,本科材料,求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-01 21:48 by chyhaha
[考研] 286分调剂 +18 Faune 2026-03-30 20/1000 2026-04-01 21:37 by 495374996
[考研] 261求调剂 +3 明仔· 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:52 by cq2548
[考研] 303分 0807学硕求调剂 +3 TYC3632 2026-04-01 3/150 2026-04-01 19:24 by lwk2004
[考研] 286求调剂 +5 lim0922 2026-03-26 5/250 2026-04-01 19:08 by 客尔美德
[考研] 337求调剂 +9 《树》 2026-03-29 9/450 2026-04-01 18:05 by 记事本2026
[考研] 材料专业调剂 +5 啦啦啦哭 2026-03-31 6/300 2026-04-01 16:48 by JourneyLucky
[考研] 0710生物学考研调剂 +3 李多米lee. 2026-03-27 4/200 2026-04-01 16:21 by zzchen2000
[考研] 086502化学工程342求调剂 +7 阿姨复古不过 2026-03-27 7/350 2026-04-01 16:14 by yanflower7133
[考研] 0856,材料与化工321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-27 14/700 2026-04-01 15:58 by yanflower7133
[考研] 环境工程调剂 +9 hyzzzzzzz. 2026-04-01 9/450 2026-04-01 14:20 by salamander`
[考研] 302求调剂一志愿北航070300,本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 10/500 2026-04-01 14:03 by ZXlzxl0425
[考研] 318求调剂 +10 陈晨79 2026-03-30 10/500 2026-03-31 17:37 by 544594351
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 麦恩莉. 2026-03-30 4/200 2026-03-31 14:35 by 记事本2026
[考研] 08工科,295,接受跨专业调剂 +6 lmnlzy 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +6 @taotao 2026-03-26 7/350 2026-03-30 10:43 by 我是小康
[考研] 一志愿北京工业大学,324分求调剂 +6 零八# 2026-03-28 6/300 2026-03-29 21:20 by nanaliuyun
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
信息提示
请填处理意见