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请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成
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mahaidong520
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请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成
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请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成
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1楼
2016-03-14 11:48:59
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mahaidong520
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8楼
:
Originally posted by
卡维斯
at 2016-03-14 18:53:08
好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。
另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参 ...
测的是rna浓度,反转后没有测,我在想如果把目的基因的浓度增大,那内参基因浓度也扩大,会不会对起峰有影响
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9楼
2016-03-15 08:44:26
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专业: 植物生理与生化
应该是cDNA模板的浓度比较低
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2楼
2016-03-14 13:02:16
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mahaidong520: 金币+3,
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很有帮助
2016-03-14 15:10:44
内参正常说明反转录还可以,目的基因起峰晚是说循环数高么?一个可能是基因表达的问题,精细取材;再一个就可能是反转录后的浓度低。
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3楼
2016-03-14 13:23:53
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mahaidong520
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3楼
:
Originally posted by
卡维斯
at 2016-03-14 13:23:53
内参正常说明反转录还可以,目的基因起峰晚是说循环数高么?一个可能是基因表达的问题,精细取材;再一个就可能是反转录后的浓度低。
测得浓度在300-700ng/ul,后稀释成30-70ng/ul,加模板为3ul,照说明书应在100ng内,正常的话浓度不会低吧,起峰都在35个循环后了,内参基因都在20-24个循环内起峰,我再把浓度提高点试试,谢谢
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4楼
2016-03-14 15:10:27
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