24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4216  |  回复: 18

mahaidong520

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成 已有2人参与

请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

南宫瑾

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

应该是cDNA模板的浓度比较低

发自小木虫Android客户端
2楼2016-03-14 13:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mahaidong520: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-14 15:10:44
内参正常说明反转录还可以,目的基因起峰晚是说循环数高么?一个可能是基因表达的问题,精细取材;再一个就可能是反转录后的浓度低。
3楼2016-03-14 13:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参的曲线来看表明你的cDNA的的起始浓度不一致,建议各样Ct值差小于0.5。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2016-03-14 18:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

mahaidong520

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
3楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 13:23:53
内参正常说明反转录还可以,目的基因起峰晚是说循环数高么?一个可能是基因表达的问题,精细取材;再一个就可能是反转录后的浓度低。

测得浓度在300-700ng/ul,后稀释成30-70ng/ul,加模板为3ul,照说明书应在100ng内,正常的话浓度不会低吧,起峰都在35个循环后了,内参基因都在20-24个循环内起峰,我再把浓度提高点试试,谢谢
4楼2016-03-14 15:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yvonne9044

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

5楼2016-03-14 15:59:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
5楼: Originally posted by yvonne9044 at 2016-03-14 15:59:30
认为二楼正解

麻烦帮忙看一下
请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成


请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成-1



发自小木虫Android客户端
6楼2016-03-14 16:31:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yvonne9044

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

7楼2016-03-14 17:44:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
8楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 18:53:08
好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参 ...

测的是rna浓度,反转后没有测,我在想如果把目的基因的浓度增大,那内参基因浓度也扩大,会不会对起峰有影响

发自小木虫Android客户端
9楼2016-03-15 08:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
8楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 18:53:08
好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参 ...

还有麻烦问一下,怎么样保持起始cdna浓度一致,谢谢

发自小木虫Android客户端
10楼2016-03-15 08:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mahaidong520 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 273求调剂 +18 李芷新1 2026-03-31 18/900 2026-04-01 19:12 by 更好的躺平
[考研] 286求调剂 +5 lim0922 2026-03-26 5/250 2026-04-01 19:08 by 客尔美德
[考研] 292分,材料与化工,申请调剂 +13 程晴之 2026-04-01 14/700 2026-04-01 18:59 by 氯化亚硝酰
[考研] 材料专硕调剂 +15 椰椰。 2026-03-29 15/750 2026-04-01 17:52 by JYD2011
[考研] 324求调剂 +10 hanamiko 2026-03-26 12/600 2026-04-01 16:59 by oooqiao
[考研] 311求调剂 +11 蓝月亮亮 2026-03-30 11/550 2026-04-01 16:33 by 七度不信任
[考研] 理学07化学 303求调剂 +9 睿08 2026-03-27 9/450 2026-04-01 15:23 by qingfeng258
[考研] 267求调剂 +13 uiybh 2026-03-31 13/650 2026-04-01 10:25 by 探123
[考研] 土木304求调剂 +3 兔突突突, 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿a区211,085601-307分求调剂 +10 党嘉豪 2026-03-31 23/1150 2026-03-31 18:44 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂,一志愿西北工业大学,材料工程(085601) +6 小小机灵虫 2026-03-29 12/600 2026-03-31 16:58 by 记事本2026
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +6 Ong3 2026-03-27 6/300 2026-03-31 15:18 by yanflower7133
[考研] 求收留 +8 1943443204 2026-03-28 8/400 2026-03-31 15:00 by -迷了路啊路
[考研] 调剂求院校招收 +7 鹤鲸鸽 2026-03-28 7/350 2026-03-31 11:21 by oooqiao
[考研] 抱歉 +3 田洪有 2026-03-30 3/150 2026-03-30 19:11 by 迷糊CCPs
[考研] 342求调剂 +4 加油a李zs 2026-03-26 4/200 2026-03-30 16:39 by 晶体之美
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
[考研] 压国家一区线,求导师收留,有恩必谢! +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 283求调剂 +3 A child 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:41 by ms629
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
信息提示
请填处理意见