9楼: Originally posted by mahaidong520 at 2016-03-15 08:44:26
测的是rna浓度，反转后没有测，我在想如果把目的基因的浓度增大，那内参基因浓度也扩大，会不会对起峰有影响
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11楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 10:19:00
那用的什么试剂盒反转录？感觉100ng有点少，我们是按照2ugRNA算的，即统一稀释成2ug，这样反转后cDNA的浓度基本是差不多的，Ct值差异还是控制在0.5以内。目的基因和内参所用模板应该是同一个。...

8楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 18:53:08
好吧，我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA？这个不用测吧，反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话，从内参 ...

13楼: Originally posted by mahaidong520 at 2016-03-15 16:14:48
能在麻烦问一下，你们用的是什么牌子的定量试剂，按照2ul反转后的定量体系是怎么样的，谢谢
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15楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 16:54:37
天根的，正常的体系呀
2X SYBR GREN    10
F                       1
R                       1
ddH2O               7
cDNA                  1
------------------------------
                    ...

16楼: Originally posted by mahaidong520 at 2016-03-15 17:22:18
那就是反转时平衡rna的质量，反转后也不用稀释，直接加1ul的cdna，对吧
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17楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 18:17:33
反转后你得标模板，用内参细微调节。...

10楼: Originally posted by mahaidong520 at 2016-03-15 08:46:06
还有麻烦问一下，怎么样保持起始cdna浓度一致，谢谢
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