应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教RT-PCR内参基因正常，目的基因起峰晚，什么原因，RNA正常，引物新和成
52/1返回列表
查看: 4604  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教RT-PCR内参基因正常，目的基因起峰晚，什么原因，RNA正常，引物新和成 已有2人参与

请教RT-PCR内参基因正常，目的基因起峰晚，什么原因，RNA正常，引物新和成
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-03-14 11:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们公司按照1微克RNA进行反转，然后得到cDNA稀释8倍作为模板上机。
试剂的话都是我们公司自己的，一直做了那么多年，一直很稳定。
你的内参CT差的比较多，建议重新反转，目的基因我个人建议你重新设计引物。
赞一下 回复此楼
有你真好
14楼2016-03-15 16:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

南宫瑾

新虫 (小有名气)
应该是cDNA模板的浓度比较低

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-03-14 13:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mahaidong520: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-14 15:10:44
内参正常说明反转录还可以，目的基因起峰晚是说循环数高么？一个可能是基因表达的问题，精细取材；再一个就可能是反转录后的浓度低。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-03-14 13:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 13:23:53
内参正常说明反转录还可以，目的基因起峰晚是说循环数高么？一个可能是基因表达的问题，精细取材；再一个就可能是反转录后的浓度低。

测得浓度在300-700ng/ul，后稀释成30-70ng/ul，加模板为3ul，照说明书应在100ng内，正常的话浓度不会低吧，起峰都在35个循环后了，内参基因都在20-24个循环内起峰，我再把浓度提高点试试，谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-14 15:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭