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mahaidong520

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教RT-PCR内参基因正常，目的基因起峰晚，什么原因，RNA正常，引物新和成 已有2人参与

请教RT-PCR内参基因正常，目的基因起峰晚，什么原因，RNA正常，引物新和成
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1楼 2016-03-14 11:48:59
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卡维斯

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by mahaidong520 at 2016-03-15 17:22:18
那就是反转时平衡rna的质量，反转后也不用稀释，直接加1ul的cdna，对吧
...

反转后你得标模板，用内参细微调节。
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17楼2016-03-15 18:17:33
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南宫瑾

新虫 (小有名气)
应该是cDNA模板的浓度比较低

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-03-14 13:02:16
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mahaidong520: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-14 15:10:44
内参正常说明反转录还可以，目的基因起峰晚是说循环数高么？一个可能是基因表达的问题，精细取材；再一个就可能是反转录后的浓度低。
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3楼2016-03-14 13:23:53
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mahaidong520

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 13:23:53
内参正常说明反转录还可以，目的基因起峰晚是说循环数高么？一个可能是基因表达的问题，精细取材；再一个就可能是反转录后的浓度低。

测得浓度在300-700ng/ul，后稀释成30-70ng/ul，加模板为3ul，照说明书应在100ng内，正常的话浓度不会低吧，起峰都在35个循环后了，内参基因都在20-24个循环内起峰，我再把浓度提高点试试，谢谢
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4楼2016-03-14 15:10:27
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