24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 4084  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成已有2人参与

请教RT-PCR内参基因正常,目的基因起峰晚,什么原因,RNA正常,引物新和成
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 18:53:08
好吧,我以为你做的半定量呢。。起峰晚可能是表达量比较低。
测得浓度是cDNA?这个不用测吧,反转录完成后用内参基因标模板使Ct值一致。按你的操作是稀释了10倍。


另外扩增曲线显示如果是一个基因的话,从内参 ...

能在麻烦问一下,你们用的是什么牌子的定量试剂,按照2ul反转后的定量体系是怎么样的,谢谢

发自小木虫Android客户端
13楼2016-03-15 16:14:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

南宫瑾

新虫 (小有名气)

应该是cDNA模板的浓度比较低

发自小木虫Android客户端
2楼2016-03-14 13:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mahaidong520: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-14 15:10:44
内参正常说明反转录还可以,目的基因起峰晚是说循环数高么?一个可能是基因表达的问题,精细取材;再一个就可能是反转录后的浓度低。
3楼2016-03-14 13:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mahaidong520

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 13:23:53
内参正常说明反转录还可以,目的基因起峰晚是说循环数高么?一个可能是基因表达的问题,精细取材;再一个就可能是反转录后的浓度低。

测得浓度在300-700ng/ul,后稀释成30-70ng/ul,加模板为3ul,照说明书应在100ng内,正常的话浓度不会低吧,起峰都在35个循环后了,内参基因都在20-24个循环内起峰,我再把浓度提高点试试,谢谢
4楼2016-03-14 15:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见