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[交流]
关于表达一个蛋白 已有6人参与
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我的目的基因连接了pet 32a，之前测序和pcr 鉴定正确，但是到了诱导表达的时候出了问题，正常情况取1－2ml 的菌制样，跑SDS PAGE 能看到明显的一条目的蛋白大小的条带，但是我的需要10ml的菌液离心下来菌，制样才能看到那个明显的条带。请问，有人能帮我分析分析么？（新人第一次发帖，在此谢过各路大神）图片的话，需要我就拷贝上传 发自小木虫IOS客户端 |
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5楼2016-03-07 07:28:24
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楼主是先取了1～2毫升没有检测到目的条带么，建议还是上图吧，不知道你摇瓶菌体诱导后的生长情况，诱导温度是多少？当然不同的蛋白表达情况也是不一样的，至少你还可以看到目的条带 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-03-06 19:48:34
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楼主的意思是诱导表达量太少了所以才需要10ml菌液吗？ 可以试试把样品分成胞内蛋白、细胞碎片以及全细胞三个样品一起跑PAGE，看看是不是不可溶蛋白。 如果是可溶蛋白，那就要探究一下诱导的各个条件有没有问题了。 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2016-03-07 00:15:38
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