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切胶回收纯化的DNA浓度太低不能用于连接载体,请教如何提高DNA浓度 已有3人参与
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| 从头说起是这样的,我是使用试剂盒提的核酸,提取后电泳没有条带。后来我用特异性引物进行了扩增,扩增结果不错,条带单一,位置大体也对,但是亮度一般。由于我的核酸不多,现在也就是还有30ul,而每次扩增模板量要2ul,所以今天上午我就把模板稀释了一下,用这个稀释的DNA又进行了扩增,准备回收纯化其中的DNA。可是PCR后电泳的结果不好,比较不亮,但是我坚持进行了切胶回收纯化,使用的是宝生物的盒子,回收后又电泳了一次,这次条带的亮度也就是能刚刚看到的样子,我自己知道这个浓度是不能做往下做连接的。求大神不吝赐教!另外还是有个问题,我发现回收后的条带位置比我PCR扩增的条带的位置更靠上了,这是怎么回事?今天没能拷出来电泳图,如果需要我后续补充。谢谢各位了!!!! |
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我不需要酶切的,你说的方法我也想到了,虽然核酸还可以再提,但是确实麻烦一些,我打算再用原倍的做一次,没有核酸就只能再提了。你说的可以进行克隆,我就是担心浓度太低连接不上去啊 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2016-02-29 09:15:22
kaobo2012
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2楼2016-02-27 21:16:19
fudan671
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3楼2016-02-27 21:37:18
jackyoung
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-28 10:12:02
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-28 10:12:02
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是提的DNA么?PCR的引物和条件有没有优化?目前这一步只能从提高PCR括增的量方面来优化。 发自小木虫Android客户端 |

4楼2016-02-28 00:15:16










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