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DEAE纤维柱断层求助 已有2人参与
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| 求助，各位虫友，我的柱子装好后，加恒流泵后经常断层，不知何因？填料是DEAE-52，柱子是中压层析柱，200g的填料溶于400ml的水，填料上柱前，放入抽滤瓶里真空脱过起泡，上柱沉降后没什么问题，但恒流泵平衡后，会出现断层的现象，各位知道为什么吗，给些建议，求教 |
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你可以试试，不过我不知道你是从什么里面提取出的多糖，还有你上柱子前多糖处理过没有，如果你的粗多糖只是水提醇沉得到话，应该进行脱色、脱蛋白处理，否则会影响到你得分离效果。至于你上样量的问题，你问厂家也是白问，不同糖上样量不一样的。DEAE-52是阴离子交换柱，用来分离中性多糖和酸性多糖。上样后一般都是阶段性梯度洗脱，洗脱液一般是水、0.1、0.3、0.5、0.7mol/L的NaCl，其中水洗下来的为中性多糖。你的上样量根据我的经验和你的填料量上1g应该不是问题，但我不了解你得多糖只能这样推测。想确定上样量是否过载：1.先进行预实验，少量上样（可以是几百毫克，建议不要太多，这一步最好不要过载），看你的多糖各个洗脱阶段的洗脱情况。2.假如你的多糖是酸性多糖和中性多糖的混合多糖，你就可以做出洗脱曲线。3.这一步你可以增加上样量，可以增加一倍或者按照三分之二增加（假如原来上样600mg，这次你可以上样1g），然后绘制洗脱曲线，假如刚开始洗脱不久就有多糖出来同时者其他洗脱组分峰（中性多糖组分和酸性多糖组分）未明显增加说明你过载了，反之你可以继续增加上样量。4.假如只有酸性多糖，原理与上面的方法一样的。如果你前期脱色脱蛋白了，可以先试试 |
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陶盛昌11楼2014-06-03 14:18:03
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| DEAE-52属于阴离子交换柱，一般上柱前先得预处理，一般是保存在一定浓度的乙醇中，先得用水充分溶胀（过夜）并除去其中的乙醇和不溶物，建议过夜后用水多洗几次。然后用碱-酸-碱处理，并用蒸馏水洗至中性即可上柱。不知道楼主这些做没做，如果做了，还断层请问你得柱子什么规格，纤维素柱一般用短粗的，平衡流速一般1ml/min，这个平衡时的流速一定要大于你得上样后的洗脱流速，不然可能会断层或者降低柱效，造成你试验的重现性差，请楼主参考 |
2楼2014-05-26 11:05:19
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4楼2014-05-26 13:13:01
5楼2014-05-26 14:47:39
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谢谢神雕哥，我的平衡时间有18个小时，我洗脱样品的流速确实是1ml/min，平衡的流速也是1ml/min，不知道到时候会不会有什么问题？我的填料是国产的，上海源叶生物的，有可能是国产的均一性不好，柱高的话已经平衡好了，我平衡了18个小时，柱高没什么变化了。我装了几次柱子，都会出现皱纹，我想会不会就是这样的，只要不断层，没有大气泡，柱高稳定，应该不会有什么问题，所以我准备先上样洗脱观察结果怎么样，如果一切正常，那么柱子有些小皱纹就应该是没有什么大影响的。还有顺便问问，我的柱子是3.5*50cm的中压柱，装的是200g的DEAE-52，如果上样的话，上样的量应该是多少？我查了很多文献，大多只上几百毫克，我想问这个有没有什么规律，多少量的DEAE-52可以上多少量的样品？我有10g的粗多糖，要是每次只上几百毫克，那要上好多次，很有点繁琐。请神雕哥指点，谢谢 |
8楼2014-06-02 19:35:45
9楼2014-06-02 19:43:12
lihuan0525
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10楼2014-06-03 09:10:53
