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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物化学 » DEAE纤维柱断层求助
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神雕哥

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 陶盛昌 at 2014-06-02 19:35:45
谢谢神雕哥，我的平衡时间有18个小时，我洗脱样品的流速确实是1ml/min，平衡的流速也是1ml/min，不知道到时候会不会有什么问题？我的填料是国产的，上海源叶生物的，有可能是国产的均一性不好，柱高的话已经平衡好 ...

你可以试试，不过我不知道你是从什么里面提取出的多糖，还有你上柱子前多糖处理过没有，如果你的粗多糖只是水提醇沉得到话，应该进行脱色、脱蛋白处理，否则会影响到你得分离效果。至于你上样量的问题，你问厂家也是白问，不同糖上样量不一样的。DEAE-52是阴离子交换柱，用来分离中性多糖和酸性多糖。上样后一般都是阶段性梯度洗脱，洗脱液一般是水、0.1、0.3、0.5、0.7mol/L的NaCl，其中水洗下来的为中性多糖。你的上样量根据我的经验和你的填料量上1g应该不是问题，但我不了解你得多糖只能这样推测。想确定上样量是否过载：1.先进行预实验，少量上样（可以是几百毫克，建议不要太多，这一步最好不要过载），看你的多糖各个洗脱阶段的洗脱情况。2.假如你的多糖是酸性多糖和中性多糖的混合多糖，你就可以做出洗脱曲线。3.这一步你可以增加上样量，可以增加一倍或者按照三分之二增加（假如原来上样600mg，这次你可以上样1g），然后绘制洗脱曲线，假如刚开始洗脱不久就有多糖出来同时者其他洗脱组分峰（中性多糖组分和酸性多糖组分）未明显增加说明你过载了，反之你可以继续增加上样量。4.假如只有酸性多糖，原理与上面的方法一样的。如果你前期脱色脱蛋白了，可以先试试
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陶盛昌
11楼2014-06-03 14:18:03
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陶盛昌

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lihuan0525 at 2014-06-03 09:10:53
这个和你的填料的吸附性有关，因为一旦吸附饱和了，你在过柱子，也无法吸住了，都会随着上样液流走，所以楼主要问问厂家那边离子载量...

感谢！
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@@@@@@
12楼2014-06-03 17:10:17
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陶盛昌

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 神雕哥 at 2014-06-03 14:18:03
你可以试试，不过我不知道你是从什么里面提取出的多糖，还有你上柱子前多糖处理过没有，如果你的粗多糖只是水提醇沉得到话，应该进行脱色、脱蛋白处理，否则会影响到你得分离效果。至于你上样量的问题，你问厂家也 ...

谢谢神雕哥这么详尽的回答，我的多糖是石斛多糖，从石斛中提取的植物多糖，粗多糖经过石油醚脱脂，80乙醇除小分子，sevag法除蛋白，最后得到的粗多糖挺白的，色素应该较少，我这个多糖粘度有点大，我现在正在洗脱，我上了300mg的样品，先洗脱出来，然后做标准曲线。我会按照你说的这个方案做下预实验看上样量多少比较合适，再次谢谢神雕哥！
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@@@@@@
13楼2014-06-03 17:36:45
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