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神雕哥

木虫 (正式写手)

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8楼: Originally posted by 陶盛昌 at 2014-06-02 19:35:45
谢谢神雕哥,我的平衡时间有18个小时,我洗脱样品的流速确实是1ml/min,平衡的流速也是1ml/min,不知道到时候会不会有什么问题?我的填料是国产的,上海源叶生物的,有可能是国产的均一性不好,柱高的话已经平衡好 ...

你可以试试,不过我不知道你是从什么里面提取出的多糖,还有你上柱子前多糖处理过没有,如果你的粗多糖只是水提醇沉得到话,应该进行脱色、脱蛋白处理,否则会影响到你得分离效果。至于你上样量的问题,你问厂家也是白问,不同糖上样量不一样的。DEAE-52是阴离子交换柱,用来分离中性多糖和酸性多糖。上样后一般都是阶段性梯度洗脱,洗脱液一般是水、0.1、0.3、0.5、0.7mol/L的NaCl,其中水洗下来的为中性多糖。你的上样量根据我的经验和你的填料量上1g应该不是问题,但我不了解你得多糖只能这样推测。想确定上样量是否过载:1.先进行预实验,少量上样(可以是几百毫克,建议不要太多,这一步最好不要过载),看你的多糖各个洗脱阶段的洗脱情况。2.假如你的多糖是酸性多糖和中性多糖的混合多糖,你就可以做出洗脱曲线。3.这一步你可以增加上样量,可以增加一倍或者按照三分之二增加(假如原来上样600mg,这次你可以上样1g),然后绘制洗脱曲线,假如刚开始洗脱不久就有多糖出来同时者其他洗脱组分峰(中性多糖组分和酸性多糖组分)未明显增加说明你过载了,反之你可以继续增加上样量。4.假如只有酸性多糖,原理与上面的方法一样的。如果你前期脱色脱蛋白了,可以先试试

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11楼2014-06-03 14:18:03
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陶盛昌

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by lihuan0525 at 2014-06-03 09:10:53
这个和你的填料的吸附性有关,因为一旦吸附饱和了,你在过柱子,也无法吸住了,都会随着上样液流走,所以楼主要问问厂家那边离子载量...

感谢!
@@@@@@
12楼2014-06-03 17:10:17
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陶盛昌

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 神雕哥 at 2014-06-03 14:18:03
你可以试试,不过我不知道你是从什么里面提取出的多糖,还有你上柱子前多糖处理过没有,如果你的粗多糖只是水提醇沉得到话,应该进行脱色、脱蛋白处理,否则会影响到你得分离效果。至于你上样量的问题,你问厂家也 ...

谢谢神雕哥这么详尽的回答,我的多糖是石斛多糖,从石斛中提取的植物多糖,粗多糖经过石油醚脱脂,80乙醇除小分子,sevag法除蛋白,最后得到的粗多糖挺白的,色素应该较少,我这个多糖粘度有点大,我现在正在洗脱,我上了300mg的样品,先洗脱出来,然后做标准曲线。我会按照你说的这个方案做下预实验看上样量多少比较合适,再次谢谢神雕哥!
@@@@@@
13楼2014-06-03 17:36:45
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