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陶盛昌

木虫 (正式写手)

[求助] DEAE纤维柱断层求助已有2人参与

求助,各位虫友,我的柱子装好后,加恒流泵后经常断层,不知何因?填料是DEAE-52,柱子是中压层析柱,200g的填料溶于400ml的水,填料上柱前,放入抽滤瓶里真空脱过起泡,上柱沉降后没什么问题,但恒流泵平衡后,会出现断层的现象,各位知道为什么吗,给些建议,求教
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陶盛昌

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 神雕哥 at 2014-06-03 14:18:03
你可以试试,不过我不知道你是从什么里面提取出的多糖,还有你上柱子前多糖处理过没有,如果你的粗多糖只是水提醇沉得到话,应该进行脱色、脱蛋白处理,否则会影响到你得分离效果。至于你上样量的问题,你问厂家也 ...

谢谢神雕哥这么详尽的回答,我的多糖是石斛多糖,从石斛中提取的植物多糖,粗多糖经过石油醚脱脂,80乙醇除小分子,sevag法除蛋白,最后得到的粗多糖挺白的,色素应该较少,我这个多糖粘度有点大,我现在正在洗脱,我上了300mg的样品,先洗脱出来,然后做标准曲线。我会按照你说的这个方案做下预实验看上样量多少比较合适,再次谢谢神雕哥!
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13楼2014-06-03 17:36:45
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神雕哥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
辣笔v小新: 金币+2, 鼓励应助交流 2014-05-26 12:35:24
陶盛昌: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-26 14:50:17
DEAE-52属于阴离子交换柱,一般上柱前先得预处理,一般是保存在一定浓度的乙醇中,先得用水充分溶胀(过夜)并除去其中的乙醇和不溶物,建议过夜后用水多洗几次。然后用碱-酸-碱处理,并用蒸馏水洗至中性即可上柱。不知道楼主这些做没做,如果做了,还断层请问你得柱子什么规格,纤维素柱一般用短粗的,平衡流速一般1ml/min,这个平衡时的流速一定要大于你得上样后的洗脱流速,不然可能会断层或者降低柱效,造成你试验的重现性差,请楼主参考
2楼2014-05-26 11:05:19
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陶盛昌

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 神雕哥 at 2014-05-26 11:05:19
DEAE-52属于阴离子交换柱,一般上柱前先得预处理,一般是保存在一定浓度的乙醇中,先得用水充分溶胀(过夜)并除去其中的乙醇和不溶物,建议过夜后用水多洗几次。然后用碱-酸-碱处理,并用蒸馏水洗至中性即可上柱。 ...

谢谢神雕哥,前处理都没问题,是用碱酸碱处理过的,平衡速度也是1ml每分钟,不过上样前真空抽除气泡时有些小气泡除不去,不知道是不是那个影响?柱子上层有些皱纹,不致密,不知何因?神雕哥帮忙看看
DEAE纤维柱断层求助


DEAE纤维柱断层求助-1

@@@@@@
3楼2014-05-26 11:55:01
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
陶盛昌: 金币+2 2014-05-26 14:49:11
楼主不知道你怎么装柱的,我以前装过纯化蛋白的,也是离子交换的, 在装完后需要用蠕动泵给柱子一个压力,把填料压实,然后再把柱中多余的水分给拍出来。
4楼2014-05-26 13:13:01
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