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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物化学 » DEAE纤维柱断层求助
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陶盛昌

木虫 (正式写手)

[求助] DEAE纤维柱断层求助 已有2人参与

求助，各位虫友，我的柱子装好后，加恒流泵后经常断层，不知何因？填料是DEAE-52，柱子是中压层析柱，200g的填料溶于400ml的水，填料上柱前，放入抽滤瓶里真空脱过起泡，上柱沉降后没什么问题，但恒流泵平衡后，会出现断层的现象，各位知道为什么吗，给些建议，求教
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@@@@@@
1楼 2014-05-26 10:44:57
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
陶盛昌: 金币+2 2014-05-26 14:49:11
楼主不知道你怎么装柱的，我以前装过纯化蛋白的，也是离子交换的， 在装完后需要用蠕动泵给柱子一个压力，把填料压实，然后再把柱中多余的水分给拍出来。
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4楼2014-05-26 13:13:01
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神雕哥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
辣笔v小新: 金币+2, 鼓励应助交流 2014-05-26 12:35:24
陶盛昌: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-26 14:50:17
DEAE-52属于阴离子交换柱，一般上柱前先得预处理，一般是保存在一定浓度的乙醇中，先得用水充分溶胀（过夜）并除去其中的乙醇和不溶物，建议过夜后用水多洗几次。然后用碱-酸-碱处理，并用蒸馏水洗至中性即可上柱。不知道楼主这些做没做，如果做了，还断层请问你得柱子什么规格，纤维素柱一般用短粗的，平衡流速一般1ml/min，这个平衡时的流速一定要大于你得上样后的洗脱流速，不然可能会断层或者降低柱效，造成你试验的重现性差，请楼主参考
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2楼2014-05-26 11:05:19
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陶盛昌

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 神雕哥 at 2014-05-26 11:05:19
DEAE-52属于阴离子交换柱，一般上柱前先得预处理，一般是保存在一定浓度的乙醇中，先得用水充分溶胀（过夜）并除去其中的乙醇和不溶物，建议过夜后用水多洗几次。然后用碱-酸-碱处理，并用蒸馏水洗至中性即可上柱。 ...

谢谢神雕哥，前处理都没问题，是用碱酸碱处理过的，平衡速度也是1ml每分钟，不过上样前真空抽除气泡时有些小气泡除不去，不知道是不是那个影响？柱子上层有些皱纹，不致密，不知何因？神雕哥帮忙看看
DEAE纤维柱断层求助


DEAE纤维柱断层求助-1
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@@@@@@
3楼2014-05-26 11:55:01
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陶盛昌

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lihuan0525 at 2014-05-26 13:13:01
楼主不知道你怎么装柱的，我以前装过纯化蛋白的，也是离子交换的， 在装完后需要用蠕动泵给柱子一个压力，把填料压实，然后再把柱中多余的水分给拍出来。

先谢谢lihuan0525，我的装柱步骤是：将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱材（填料真空抽除过气泡后），轻轻倒入层析柱中，树脂自然慢慢沉降再层析柱底部，树脂沉积直到离层析柱上端1.5－2cm处，停止装柱。然后接蠕动泵给他一个压力，但就会出现上图的那种现象，请问何解？加的压力也不是很大啊，恒流泵就40转每分钟，谢谢
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@@@@@@
5楼2014-05-26 14:47:39
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