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有关含氨苄青霉素的固体培养基上大肠杆菌培养的问题 已有2人参与
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这几天在做质粒提取的实验，把含有氨苄青霉素抗性的质粒(我们一共转了四种不同的质粒，但每种质粒上都含有抗氨苄基因)转入大肠杆菌感受态细胞后，将该细胞涂布于含有氨苄青霉素的固体培养基上培养（约在第一天下午3点左右完成），第二天早上7点左右观察，只有进行GFP-actin转染的细菌在培养基上长出来了，其他培养基上均无菌落长出。之后在中午12点左右观察发现其他培养上有很小很小的菌落长出，更悲剧的是连对照组（将未转染过的感受态细胞涂布于含氨苄的培养基上）也长出了细菌。 这种情况，想请问一下各位： 1：后来才长出的那些菌落是否是杂菌呢，而不是我们想要的转染入质粒的细菌。 2：如果是杂菌生长，为何会产生这种现象呢？（网上有看到说可能是培养基中抗生素失效的原因） 3：将菌落挑入含氨苄的LB培养基后，是否一定需要振荡培养。  谢谢了 |
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 细菌培养 |
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2楼2013-08-18 17:34:30
小小亚杰
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3楼2013-08-19 00:32:58
Sthunder
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【答案】应助回帖
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laozuzunzhe: 金币+4, good！ 2013-08-19 19:50:33
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1：后来才长出的那些菌落是否是杂菌呢，而不是我们想要的转染入质粒的细菌。 2：如果是杂菌生长，为何会产生这种现象呢？（网上有看到说可能是培养基中抗生素失效的原因） 根据你的对照看，后来的菌是来自你感受态的菌，也就是说有两种可能，a 感受态感染了抗Amp的菌，b，你的Amp失效或者使用浓度过低。此外，楼上说说的卫星菌落是指你有阳性菌落，由于时间过长，菌落周围抗生素被分解而导致原被抑制的感受态细胞复活的现象，而你的菌很明显不是这样。建议新鲜配置Amp or提高你的Amp浓度，重新制备感受态，重新转化！ 3：将菌落挑入含氨苄的LB培养基后，是否一定需要振荡培养。 菌体在液体培养基中是需要振荡培养的哈，否则会长得非常慢！！ Good luck！ |
4楼2013-08-19 07:08:41
zhangbighui
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