各位虫友，为什么我的pcr结果跑不出来呢？溶解曲线感觉没啥问题，但是就是有的跑得出来，有的跑不出来。我是反转录后在跑，浓度是1微克。69e3d1ab759cf79e3ccfc4f95a88521.jpg2b62c307d9dd...

跑了几天了换了模板，阴物，还是跑成这样，以前用这个引物很正常，这到底是什么问题

做chip做了两个多月了,用RNApolymeraseII抗体做阳参，结果检测chip-qPCR检测GAPDH，老是跑不出来，大神们能帮我分析一下原因吗？跪求

有一个疑问，既然目的基因和内参都到了平台期，为什么跑出来的条带不一样亮，我跑了39个循环，内参15个循环到达指数期，目的基因25个循环到达指数期，但是他们都在39个循环之前到达了平台期...

9月份开学就是研二的了，实验一直做不出来，很心急。...我的老师还要我做qpcr之前还要用引物和cCDA扩增一下，用来跑琼脂凝胶，看看分子量和blast上的分子量能不能对上，对上了，再做qpcr。...

但是自复工以来，同样提取得到的RNA，逆转之后跑实时PCR，内参MPPIA的Ct值都已经33以上，甚至高于35，或压根undetermined；targetgene全部都是undetermined，溶解曲线根本不规则。...

合成的含病毒目的片段的质粒摇菌后提取跑QPCR，10倍倍比稀释，第一次跑第一个浓度（2*10的7次方）ct值有16；第二次第三次跑就到17~18，导致灵敏度（2*10的1次方）ct值高于38不合格。...

科研小白刚开始做qPCR差不多一个月，也已经跑出来过一些氮循环相关的基因如：noszⅠ、noszⅡ、nirK等，目前在做的基因是amoA的古菌，但是遇到了一些问题解决不了，已经做过多次重复实验，且...

1，看书上写qPCR中两步法一般适用于片段较短的，100-200bp，我设计的引物跑出来的片段有400bp的，还能用两步法吗？2，另外问，上机的Tm提高0.3℃影响会很大不？

各位大神，我最近一直在做Qpcr，可是一直都出不来Ct值，跑出来的扩增曲线是逐渐下降趋于平稳而不是S型曲线，而且也没有Ct值出来。请问这是为什么，有什么可能的原因吗？[eimg]2017/0624/w...

如图中所示，做几个文库对HEV基因是否表达的分析，跑出来的QPCR曲线呈现如下情况，溶解曲线看起来也很纠结，不知道是什么原因？求助~[eimg]2014/0730/w131h1221753_1406703789_743.png|bcs...

问题太长，标题打不下完整提问：通过总RNA反转录cDNA和总DNA跑qPCR的16S能否通过最终拷贝数的差异确定RNA在活菌的体现上优于DNA问题有些长，新人币不多，全部贡献出来，求交流！首先有个...

但是标准曲线出来，发现P50质粒标准曲线与目的基因组偏差两个数量级，即10^5浓度下，基因组CT=16.7，质粒P50CT=25。...提取的质粒跑胶后发现出双螺旋条带外还有一个很亮的条带，是聚体？...

各位大佬，本人第一做qPCR，得到的结果不太好，不知道是什么原因，请求大家帮忙一起分析分析。目的基因参考别人文献，我在NCBI上blast了特异性可以，最后内参基因跑出来了（Ct值在24左右）...

各位友友，最近鄙人在做qpcr，但是假阳性严重。新的引物，新的水，而且已经好几天没有打开质粒模板了，但是空白跑出来还是30左右个ct值，溶解峰tm和样品一致。之前怀疑是气溶胶污染，所以都...

我有五个基因，如果我用一个模板这样去做qpcr。我不太懂溶解曲线和扩增曲线的原理。所以我是每次做一个基因，跑一次能同时得到...我不知道溶解曲线和扩增曲线是分别跑出来的还是一次跑出来的。...

QPCR单峰、后面发现模板有基因组污染，查了下引物，上下游都没有跨外显子，但是扩的条带中间夹了内含子（900...这样子的话如果基因组被扩出来那么条带大小就会不一样、那是不是就会出现双峰？...

退火温度是60时，我的溶解度曲线是第一张图。...结果是图二（Tm＝75.92）我的目的基因是180bp，跑了一个琼脂糖凝胶，只出来了一个不到100bp的带。亲们我该怎么办，改变什么条件呢！

这么折腾都没有结果……还有一个很奇怪的点是有几个样没有Ct值却跑核酸胶显示有正确大小条带，很奇怪？我怀疑是不是退火温度太高，于是将退火...是不是直接提取全DNA以此为模板才能扩增出来？...

产物跑胶发现高浓度的可以看到，（当然跑胶可能不是很敏感）5、最后一张图的荧光值全是负的，而且负的那么大，又是什么鬼~引物已经试过两种，都差不多的结果~再做不出来，要疯啦~...

最近做荧光定量，问题重重，先是跑了个内参试试，做个标曲，结果出来了，扩增效率很高，达到200%，不过溶解曲线却是单一峰；还有就是ntc也有值，搞不明白，跑了个胶发现有条带应该是引物二...

各位老师大神帮忙看看是什么问题啊，引物也换过了，真的要是做不出来就要换课题了。还有我听说可以把qPCR完了之后的产物跑电泳，哪位大神有具体...

然而qPCR跑出来的结果就是质粒只有前几个浓度还有，后面几个Ct值过高检测不到。请各位大神帮忙找下问题所在，多谢！微信图片_20180808104232.jpg微信图片_20180808104226.jpg微信图片_...

最近在用qPCR测处理样品中的拷贝数，但是出现了不可避免的问题。请教一下qPCR...但是这样做了几次发现，每次用标准样品得到的线性方程都会有微小的差异，算出来的处理样品中拷贝数会差很大。...

以前我们这RNA都不跑胶的，觉得没必要，就测下OD260的值，有值就可可以。现在我知道了，原来降解的RNA也有OD260值的。RNA降解了...我当时十几个老鼠都杀完后，把取出来的心脏一起冻到-70℃的。...