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求教！急！qPCR内参Ct值高至35！但之前同样的手法都能跑出来Ct18-19！ 已有1人参与
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最近提取小鼠肝细胞AML12的RNA 进行逆转，之后荧光实时PCR。在居家办公之前，内参MPPIA的Ct值有18-19左右，target gene大概26-28左右，都有比较好的扩增曲线和溶解曲线。但是自复工以来，同样提取得到的RNA，逆转之后跑实时PCR，内参MPPIA的Ct值都已经33以上，甚至高于35，或压根undetermined；target gene全部都是undetermined，溶解曲线根本不规则。 同样的手法，同样的Trizol提取方式，实在不知道是怎么回事了。目前出现这种情况已经三次，用别人的RNA sample可以跑出内参及target gene。所以怀疑是RNA样品出问题，但是今天又一次仔仔细细用Trizol提取RNA，包括*头重新灭菌，所用试剂全部换新的，再三确定无误，结果依旧不行，内参已经30好几，target gene依然undetermined。注：RNA浓度有300ng/ul左右（溶于20ulDEPC），260/280有1.8左右。 已经3次了。。同实验室的前辈也不知道是什么原因导致。。希望大神们能指点一二啊！拜谢！@biostar2009@biostar2009@wizardfan@飞约疯人院 |
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