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总RNA和总DNA跑qPCR的16S能否通过最终拷贝数的差异确定RNA在活菌的体现上优于DNA
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问题太长，标题打不下 完整提问：通过总RNA反转录cDNA和总DNA跑qPCR的16S能否通过最终拷贝数的差异确定RNA在活菌的体现上优于DNA 问题有些长，新人币不多，全部贡献出来，求交流！！！ 首先有个背景，因为RNA 的半衰期较短，通常只有几分钟到十几分钟，如果细胞膜或细胞壁破裂，RNA很快就会降解，所以希望能够通过RNA和DNA提取的差异，剔除样品中死菌 基于这样的设想，想要做方法的验证，之前有相关文献进行了这样的操作，的确是有一定的可行性，但是对于提出来的模版，他进行了高通量测序，但因为RNA比较难提，高通量成本也高，所以在每一个在做高通量之前都能有个其他的表征来验证我的操作是否成功 所以我做了以下实验，具体实验数据和方法我写在了下一张图上，如果只是根据我的稀释倍数等换算，RNA的浓度要大于DNA近25倍，后来查了资料也可能在反转录的时候要考虑到反转录后会有倍数增加，但也不会使RNA小于DNA…… 所以是否有前人告诉我计算上哪里的明显失误，或是这个方法可不可行呢 大家的一点意见都万分感谢  发自小木虫IOS客户端 |
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