应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒灵敏度跑不出来
51/1返回列表
查看: 1173  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者牛腻流利将赠送您 50 个金币

牛腻流利

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒灵敏度跑不出来 已有1人参与

合成的含病毒目的片段的质粒摇菌后提取跑QPCR，10倍倍比稀释，第一次跑第一个浓度（2*10的7次方）ct值有16；第二次第三次跑就到17~18，导致灵敏度（2*10的1次方）ct值高于38不合格。
质粒不是很稳定吗，第一次跑完了也是-20度冻存的。
第二、三次和第一次的区别就是第一次用96孔板和RNase-free水稀释质粒标曲，第二、三次用的八连管和专门的dilution稀释标曲，但是这些差别应该不是问题所在吧。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2023-05-11 16:46:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一点也不简单

新虫 (知名作家)
低浓度本来就不稳定，泊松分布原理

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2023-05-11 18:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ffplant

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
稀释倍数是不是写错了，2*10的7次方都17.8了，怎么2*10的1次方的Ct值这么大，质粒反复冻融是会影响Ct值的变化，但如果只是冻融一次应该不会变化这么大，有可能是操作的问题，误差增大了，另外你最小浓度扩增的Ct值在38的话最好看下融解曲线是否正常，有可能都不是目的条带的扩增
赞一下 回复此楼
3楼2023-05-12 17:11:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牛腻流利

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ffplant at 2023-05-12 17:11:50
稀释倍数是不是写错了，2*10的7次方都17.8了，怎么2*10的1次方的Ct值这么大，质粒反复冻融是会影响Ct值的变化，但如果只是冻融一次应该不会变化这么大，有可能是操作的问题，误差增大了，另外你最小浓度扩增的Ct值在 ...

对啊，就是1次方的CT值太大了，没有熔解曲线，是Taqman探针法
是不是低溶度的质粒冻融一次好像就会降解了
赞一下 回复此楼
4楼2023-05-25 16:28:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

打工人小欢

铁虫 (初入文坛)
反复冻熔会导致质粒降解，如果是一周内使用，放在四度完全没有问题。另外做标曲的时候，建议十倍梯度稀释，按理说，你引物探针扩增效率还行的话，10*7 cp/mL跑到16、17，10*3 cp/mL会在34-36左右，每稀释一个数量级，CT值后延3.2左右才是正常的。希望对你有帮助。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2023-06-08 15:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 牛腻流利 的主题更新
51/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 03:58 by gy1nBQXYQJqL
[基金申请] 国自然评审意见 +11 wangmingqi 2026-08-28 15/750 2026-08-29 00:17 by fangyl2005
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +3 bud_bud 2026-08-27 6/300 2026-08-28 11:53 by bud_bud
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭