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质粒灵敏度跑不出来已有1人参与
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合成的含病毒目的片段的质粒摇菌后提取跑QPCR，10倍倍比稀释，第一次跑第一个浓度（2*10的7次方）ct值有16；第二次第三次跑就到17~18，导致灵敏度（2*10的1次方）ct值高于38不合格。 质粒不是很稳定吗，第一次跑完了也是-20度冻存的。 第二、三次和第一次的区别就是第一次用96孔板和RNase-free水稀释质粒标曲，第二、三次用的八连管和专门的dilution稀释标曲，但是这些差别应该不是问题所在吧。 |
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反复冻熔会导致质粒降解，如果是一周内使用，放在四度完全没有问题。另外做标曲的时候，建议十倍梯度稀释，按理说，你引物探针扩增效率还行的话，10*7 cp/mL跑到16、17，10*3 cp/mL会在34-36左右，每稀释一个数量级，CT值后延3.2左右才是正常的。希望对你有帮助。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2023-06-08 15:08:23
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