应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒灵敏度跑不出来
51/1返回列表
查看: 886  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者牛腻流利将赠送您 50 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

牛腻流利

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒灵敏度跑不出来 已有1人参与

合成的含病毒目的片段的质粒摇菌后提取跑QPCR，10倍倍比稀释，第一次跑第一个浓度（2*10的7次方）ct值有16；第二次第三次跑就到17~18，导致灵敏度（2*10的1次方）ct值高于38不合格。
质粒不是很稳定吗，第一次跑完了也是-20度冻存的。
第二、三次和第一次的区别就是第一次用96孔板和RNase-free水稀释质粒标曲，第二、三次用的八连管和专门的dilution稀释标曲，但是这些差别应该不是问题所在吧。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2023-05-11 16:46:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牛腻流利

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ffplant at 2023-05-12 17:11:50
稀释倍数是不是写错了，2*10的7次方都17.8了，怎么2*10的1次方的Ct值这么大，质粒反复冻融是会影响Ct值的变化，但如果只是冻融一次应该不会变化这么大，有可能是操作的问题，误差增大了，另外你最小浓度扩增的Ct值在 ...

对啊，就是1次方的CT值太大了，没有熔解曲线，是Taqman探针法
是不是低溶度的质粒冻融一次好像就会降解了
赞一下 回复此楼
4楼2023-05-25 16:28:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

一点也不简单

新虫 (知名作家)
低浓度本来就不稳定，泊松分布原理

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2023-05-11 18:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ffplant

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
稀释倍数是不是写错了，2*10的7次方都17.8了，怎么2*10的1次方的Ct值这么大，质粒反复冻融是会影响Ct值的变化，但如果只是冻融一次应该不会变化这么大，有可能是操作的问题，误差增大了，另外你最小浓度扩增的Ct值在38的话最好看下融解曲线是否正常，有可能都不是目的条带的扩增
赞一下 回复此楼
3楼2023-05-12 17:11:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

打工人小欢

铁虫 (初入文坛)
反复冻熔会导致质粒降解，如果是一周内使用，放在四度完全没有问题。另外做标曲的时候，建议十倍梯度稀释，按理说，你引物探针扩增效率还行的话，10*7 cp/mL跑到16、17，10*3 cp/mL会在34-36左右，每稀释一个数量级，CT值后延3.2左右才是正常的。希望对你有帮助。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2023-06-08 15:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +7 2026调剂侠 2026-03-12 7/350 2026-03-13 09:23 by 星空星月
[考研] 281求调剂 +7 Koxui 2026-03-12 8/400 2026-03-13 09:02 by Linda Hu
[考研] 材料301分求调剂 +4 Liyouyumairs 2026-03-12 4/200 2026-03-12 15:46 by peike
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +7 jiaanl 2026-03-11 7/350 2026-03-12 13:08 by Equinoxhua
[考研] 290求调剂 +8 ADT 2026-03-11 8/400 2026-03-12 12:24 by 黑钻子
[考研] 312求调剂 +5 陌宸希 2026-03-10 5/250 2026-03-11 07:18 by macy2011
[考研] 315食品工程求调剂 +4 Oreov0 2026-03-06 7/350 2026-03-10 18:56 by 清风月
[考研] 0817学硕华东区求调剂 +3 30660438 2026-03-08 3/150 2026-03-10 16:55 by Pegasus0429
[考研] 材料与化工 一志愿山大 321分 求调剂 +6 每天散步 2026-03-09 7/350 2026-03-10 10:52 by 星空星月
[考研] 一志愿山东大学，总分327，英语二79，有论文，有竞赛，已过四六级 +3 木木目目1 2026-03-09 3/150 2026-03-09 19:52 by yuningshan
[考研] 307求调剂 +3 辛仁豆腐 2026-03-08 5/250 2026-03-09 14:09 by macy2011
[考研] 070300化学求调剂 +5 扑风铃的猫 2026-03-08 10/500 2026-03-09 13:58 by macy2011
[考研] 考研调剂，一志愿山东大学材料与化工，328分，政治51 +5 关你西红柿929 2026-03-08 6/300 2026-03-09 13:50 by 新篇章DFSS
[考研] 求调剂，数一英一274分 +4 小菲会努力 2026-03-08 4/200 2026-03-09 12:40 by 一定上岸哟_
[考研] 337求调剂 +3 睡醒，。 2026-03-09 3/150 2026-03-09 10:02 by 求调剂zz
[考研] 0703化学求调剂，总分309分，一志愿华南师范 +3 花与叶@ 2026-03-08 3/150 2026-03-09 05:48 by houyaoxu
[考研] 269求调剂 +3 朔朔话 2026-03-08 4/200 2026-03-08 20:39 by 热情沙漠
[考研] 347求调剂 +4 浮云满足 2026-03-07 4/200 2026-03-08 16:46 by 星空星月
[考研] 085701环境工程专业，初试305，均过国家A区线 +7 卡卡来了@ 2026-03-07 8/400 2026-03-08 06:40 by 刘兵
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭