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[求助]
连接转化问题，求教。 已有2人参与
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我这两天在做连接转化，有两个对照组，一个是只加质粒，一个是只加目的基因。连接反应是平末端连接。 结果发现，只加质粒的对照组菌落只有两三个，但是只加目的基因的对照组菌落却有十几二十个，实验组有50-60个。 为什么只加目的基因的对照组长得这么多，不科学啊！我板子是Amp，按只加质粒对照组来看，amp是没有失效的。个人认为目的基因也没有污染，因为是从其他质粒上酶切胶回收来的，跑胶看过很单一。 这是怎么回事？！有大神知道吗？ |
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菌液浓度不一致很正常，你能保证每个克隆挑取的菌的个数是一样的吗。酶切正确，不用大提质粒，可以直接PCR,或者是测序，直接测序比较简单直白。只需要测4个中的一个。以后也不用提取24个质粒，直接用菌液PCR就可以。或者直接用菌落进行pcr，正确的提取质粒送测序 发自小木虫Android客户端 |
11楼2016-02-05 08:22:26
lifechuteng
新虫 (小有名气)
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2楼2016-02-02 08:56:19
yzc937168
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3楼2016-02-02 09:56:09
感谢参与，应助指数 +1
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4楼2016-02-03 09:16:05