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王继楼马

新虫 (小有名气)

[求助] 连接转化问题,求教。已有2人参与

我这两天在做连接转化,有两个对照组,一个是只加质粒,一个是只加目的基因。连接反应是平末端连接。

结果发现,只加质粒的对照组菌落只有两三个,但是只加目的基因的对照组菌落却有十几二十个,实验组有50-60个。

为什么只加目的基因的对照组长得这么多,不科学啊!我板子是Amp,按只加质粒对照组来看,amp是没有失效的。个人认为目的基因也没有污染,因为是从其他质粒上酶切胶回收来的,跑胶看过很单一。

这是怎么回事?!有大神知道吗?
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werq63

金虫 (著名写手)

菌液浓度不一致很正常,你能保证每个克隆挑取的菌的个数是一样的吗。酶切正确,不用大提质粒,可以直接PCR,或者是测序,直接测序比较简单直白。只需要测4个中的一个。以后也不用提取24个质粒,直接用菌液PCR就可以。或者直接用菌落进行pcr,正确的提取质粒送测序

发自小木虫Android客户端
11楼2016-02-05 08:22:26
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